本方案提供了使用SAINT sRNA（目錄號(hào)：SR-2003-01、SR-2003-02、SR-2003-04）。
無血清轉(zhuǎn)染方案：
1.準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
粘附細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞置于0.5ml生長(zhǎng)培養(yǎng)基血清中，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)融合50-80%。
懸浮細(xì)胞：在制備復(fù)合物之前，將0.5-1.5x106個(gè)細(xì)胞懸浮在0.5ml無血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。
2.讓SAINT sRNA小瓶達(dá)到室溫。
3.將SAINT sRNA充分渦旋約30秒。
4.使用1:40的siRNA（µg）與SAINT sRNA（µl）比率制備復(fù)合物。
5.對(duì)于每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，按如下步驟制備復(fù)合物：
a.在50µl PBS中稀釋0.125μg siRNA。
b.將5µl SAINT sRNA加入siRNA/PBS溶液中，輕輕重新懸浮。
7.在室溫下將混合物孵育5-10分鐘（溶液可能看起來渾濁）。
8.向細(xì)胞中添加復(fù)合物：
粘附細(xì)胞：從細(xì)胞中吸取生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并將復(fù)合物填充至0.5ml使用無血清生長(zhǎng)培養(yǎng)基。向細(xì)胞中加入去復(fù)合物（0.5ml）。
懸浮池：將制備的復(fù)合物逐滴加入孔中。
9.在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞2-3小時(shí)。
10.在基因敲除測(cè)試前1-3天。 向孔中加入1ml含血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并在37°C的CO2孵化器中孵育細(xì)胞，
提供商 |
上海牧榮生物科技有限公司 | 下載次數(shù) |
0次 |
資料大小 |
575.6KB | 資料類型 |
PDF 文件 |
資料圖片 |
-- | 瀏覽次數(shù) |
56次 |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
5
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)