貼壁細(xì)胞的有效傳代培養(yǎng)需要將它們從培養(yǎng)容器中分離出來(lái)。采用多種方法，每種方法適合不同的細(xì)胞類(lèi)型和條件。選擇解離方法時(shí)，考慮細(xì)胞系的具體需求和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)至關(guān)重要。定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力，目標(biāo)是在傳代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞活力超過(guò) 90%，這對(duì)于培養(yǎng)物的持續(xù)健康和生產(chǎn)力至關(guān)重要。以下是這些過(guò)程的概述：
程序 | 解離劑 | 典型應(yīng)用 |
機(jī)械抖落 | 通過(guò)搖動(dòng)或移液輕輕或劇烈攪拌 | 用于松散貼壁或處于有絲分裂期的細(xì)胞。 |
機(jī)械刮削 | 物理工具，例如細(xì)胞刮刀 | 適用于蛋白酶敏感細(xì)胞，盡管它可能很苛刻并且具有潛在的破壞性。 |
酶處理 | 胰蛋白酶溶液 | 對(duì)于牢固粘附在培養(yǎng)容器上的細(xì)胞有效。 |
酶處理 | 胰蛋白酶+膠原酶 | 非常適合致密細(xì)胞培養(yǎng)或多層生長(zhǎng)的細(xì)胞，特別是成纖維細(xì)胞。 |
酶處理 | 分散酶 | 可以去除完整片材中的表皮細(xì)胞，保持細(xì)胞間的連接。 |
酶處理 | TrypLE™ 酶 | 適用于牢固貼壁細(xì)胞的強(qiáng)解離選項(xiàng)，適用于需要非動(dòng)物源試劑的實(shí)驗(yàn)方案。 |
酶處理 | Accutase | 胰蛋白酶的溫和替代品，對(duì)多種細(xì)胞類(lèi)型有效，包括干細(xì)胞和原代細(xì)胞。 |
酶處理 | 胰蛋白酶+EDTA | 用于通過(guò)螯合二價(jià)陽(yáng)離子來(lái)增強(qiáng)細(xì)胞脫離、促進(jìn)酶活性的組合。 |
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