在不斷發(fā)展的微生物學(xué)和質(zhì)量控制領(lǐng)域，快速微生物方法（Rapid Microbial Method，RMM）已成為一種強(qiáng)大的工具，在制藥、食品和飲料檢測以及環(huán)境監(jiān)控中用于對微生物進(jìn)行檢測和計(jì)數(shù)。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)法相比，這些創(chuàng)新技術(shù)能更快地得出結(jié)果、提高靈敏度和檢測效率。但是，在任何實(shí)驗(yàn)室使用RMM方法前，都必須用各種相關(guān)微生物對其性能進(jìn)行嚴(yán)格的測試和驗(yàn)證。
本文深入探討了使用微生物對RMM進(jìn)行測試的復(fù)雜過程，以及確保這些方法可靠性和有效性需考慮的主要因素、挑戰(zhàn)和最佳做法。選擇并使用合適的微生物，將Sievers® Soleil快速微生物檢測儀與平板法進(jìn)行比較，并對關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行評(píng)估，以證明該方法的準(zhǔn)確度、精密度和專屬性。在對RMM進(jìn)行評(píng)估時(shí)，必須驗(yàn)證RMM與采用傳統(tǒng)菌落形成單位（CFU）的檢測方法的等效性。這就證明，通過RMM得出的結(jié)果與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法得出的結(jié)果一樣可靠、有意義，而且具有更快的檢測結(jié)果時(shí)間（Time to Results，TTR）優(yōu)勢。
通過了解使用微生物進(jìn)行RMM檢測的細(xì)微差別，質(zhì)量控制專業(yè)人員和微生物學(xué)家可以就檢測方法的采用做出明智的決定，優(yōu)化他們的檢測方案，并最終提高產(chǎn)品的安全和質(zhì)量。
根據(jù)《美國藥典》（USP）第<1223>章“"替代微生物方法的驗(yàn)證"、《歐洲藥典》第5.1.6章“微生物質(zhì)量控制替代方法"和《日本藥典》“一般信息G4：非無菌產(chǎn)品的微生物檢查"（尤其是“快速微生物方法"部分）來選擇微生物。
本研究選擇的微生物如下：
曲霉菌
洋蔥伯克霍爾德氏菌
缺陷假單胞菌
枯草芽孢桿菌
白色念珠菌
大腸桿菌
銅綠假單胞菌
皮氏羅爾斯頓氏菌
金黃色葡萄球菌
腸道沙門氏菌
嗜麥芽窄食單胞菌
混合菌落：缺陷假單胞菌、皮氏羅爾斯頓氏菌、嗜麥芽窄食單胞菌與洋蔥伯克霍爾德氏菌
將微生物制成儲(chǔ)備溶液并在營養(yǎng)缺乏條件下放置三天。在評(píng)估RMM時(shí)，《日本藥典》建議使用處于營養(yǎng)缺乏或高壓力狀態(tài)下的微生物，以模擬真實(shí)的條件。為了測試RMM與瓊脂平板相比的精密度和線性，對每種儲(chǔ)備溶液進(jìn)行了一系列稀釋。測試濃度分別為0.05 CFU/mL、0.1 CFU/mL、1 CFU/mL、10 CFU/mL和100 CFU/mL。在Sievers Soleil快速微生物檢測儀上測試了0.05 CFU/mL、0.1 CFU/mL和1 CFU/mL各10個(gè)重復(fù)樣本，并測試了較高濃度的6個(gè)重復(fù)樣本（10 CFU/mL和100 CFU/mL）。將微生物加入250mL瓶裝的細(xì)胞培養(yǎng)水中，然后將其分成等份，用Sievers Soleil快速微生物檢測儀和膜過濾法進(jìn)行測試。
在整個(gè)研究過程中都對陰性對照樣品進(jìn)行了檢測。此外，分析儀在每天開機(jī)時(shí)，都先以兩種不同濃度運(yùn)行系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)品。
接受標(biāo)準(zhǔn)
準(zhǔn)確度和精密度：與瓊脂平板相比，回收率>50%，目標(biāo)<200%
系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品1±5 beads/mL；標(biāo)準(zhǔn)品2±10 beads/mL
陰性對照品：<10 CFU/100mL
結(jié)果
所有生物的定量下限為0.1 CFU/ mL。 平均回收率為140.9%，符合驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。
為所有生物確定了4對數(shù)級(jí)和3對數(shù)級(jí)線性。結(jié)果見表1。
表1：Sievers Soleil快速微生物檢測儀 線性度結(jié)果 | |||
4對數(shù)級(jí) | 3對數(shù)級(jí) | ||
0.1-100 CFU/mL | 0.1-10 CFU/mL | 1-100 CFU/mL | |
曲霉菌 | 0.960 | 0.956 | 0.954 |
洋蔥伯克霍爾德氏菌 | 0.932 | 0.961 | 0.922 |
缺陷假單胞菌 | 0.992 | 0.992 | 0.991 |
枯草芽孢桿菌 | 0.984 | 0.980 | 0.981 |
白色念珠菌 | 0.990 | 0.926 | 0.989 |
大腸桿菌 | 0.993 | 0.979 | 0.992 |
銅綠假單胞菌 | 0.998 | 0.989 | 0.998 |
皮氏羅爾斯頓氏菌 | 0.963 | 0.984 | 0.957 |
金黃色葡萄球菌 | 0.989 | 0.987 | 0.987 |
腸道沙門氏菌 | 0.996 | 0.957 | 0.996 |
嗜麥芽窄食單胞菌 | 0.963 | 0.993 | 0.957 |
混合菌落 | 0.990 | 0.994 | 0.988 |
所有微生物的平均值 | 0.979 | 0.975 | 0.976 |
表2：準(zhǔn)確度結(jié)果 | |||
所有濃度的平均值 (%) | |||
平均 | 最小 | 最大 | |
曲霉菌 | 76.7 | 46.6 | 111.8 |
洋蔥伯克霍爾德氏菌 | 98.2 | 55.0 | 193.3 |
缺陷假單胞菌 | 206.6 | 103.8 | 355.6 |
枯草芽孢桿菌 | 216.2 | 109.8 | 446.2 |
白色念珠菌 | 124.9 | 61.8 | 244.8 |
大腸桿菌 | 155.4 | 85.9 | 214.7 |
銅綠假單胞菌 | 95.5 | 68.8 | 136.0 |
皮氏羅爾斯頓氏菌 | 80.1 | 41.8 | 126.6 |
金黃色葡萄球菌 | 192.4 | 119.0 | 303.7 |
腸道沙門氏菌 | 147.2 | 89.6 | 294.8 |
嗜麥芽窄食單胞菌 | 134.4 | 54.8 | 386.0 |
混合菌落 | 125.0 | 60.0 | 283.4 |
所有微生物的平均值 | 137.7 | 74.7 | 258.1 |
結(jié)果
Soleil RMM平臺(tái)的準(zhǔn)確度接受標(biāo)準(zhǔn)是>50%，目標(biāo)是<200%。表2列出了與傳統(tǒng)方法相比所有微生物和混合菌落的回收率。
在對RMM進(jìn)行評(píng)估時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室使用多種不同微生物來進(jìn)行測試很重要。微生物培養(yǎng)條件和儲(chǔ)備溶液存放條件對于模仿真實(shí)條件也非常重要。微生物的選擇應(yīng)以藥典為基礎(chǔ)，同時(shí)還要考慮自身生產(chǎn)工廠中常見的微生物。
Sievers Soleil快速微生物檢測儀代表了生物負(fù)載檢測技術(shù)的重大進(jìn)步。它集速度、性能、靈敏度和廣泛應(yīng)用于一身，是不同行業(yè)進(jìn)行微生物分析的強(qiáng)大工具。
與傳統(tǒng)方法相比，該分析儀能在45分鐘內(nèi)得出結(jié)果，大大縮短了生物負(fù)載檢測所需的時(shí)間，從而改變了“游戲"規(guī)則。這種快速檢測方法可以加快決策過程，提高生產(chǎn)效率，并有可能節(jié)省大量成本。
該分析儀的性能符合USP<1223>中規(guī)定的嚴(yán)格要求，確保分析結(jié)果的可靠性和一致性。對于監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格且沒有任何商量余地的行業(yè)來說，這種合規(guī)性至關(guān)重要。
分析儀靈敏度高，檢測限為0.05 CFU/mL，定量限為0.1 CFU/mL，可檢測極低水平的微生物污染。對于即使極小污染也會(huì)造成嚴(yán)重后果的場合，這種能力是一項(xiàng)必要要求。
總而言之，采用像Sievers Soleil快速微生物檢測儀這樣的RMM方法可以為高純水系統(tǒng)快速、準(zhǔn)確和靈敏的微生物檢測提供全面的解決方案。其功能有可能改變質(zhì)量控制流程，提高產(chǎn)品安全性，并提高依賴高純水行業(yè)的運(yùn)營效率。
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