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快速掌握顯微注射儀的使用秘籍!

閱讀:2147        發(fā)布時(shí)間:2021-5-19
  顯微注射儀采用顯微操作系統(tǒng)(倒置顯微鏡/體視顯微鏡+顯微操作器)將供體物(基因、細(xì)胞核或細(xì)胞其他成分)直接注入宿主細(xì)胞(去核卵母細(xì)胞、胚胎細(xì)胞或體外培養(yǎng)的細(xì)胞)中,研究供體物的功能或者獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的技術(shù)。
 
  顯微注射儀的操作過(guò)程:
 
  一、針頭裝液:
 
  1、使用無(wú)菌的微量加樣器從微注射針頭的后部加入0.5~1μl的注射樣品。
 
  2、使用玻璃毛細(xì)管拉出毛細(xì)管針頭,里面有與毛細(xì)管平行的細(xì)絲,有利于液體從后部向針頭方向運(yùn)動(dòng)。只需在針頭后部浸入1mm深度,不需使用手指或其他東西接觸,就足以使少量的樣品到達(dá)針尖部。
 
  二、針頭定位:
 
  1、將裝液后的針頭的游離端安在連接器上,然后旋緊連接器以固定針頭,再將其固定到微操作儀的托針管上。
 
  2、把載有待注射細(xì)胞的蓋玻片轉(zhuǎn)移到里面有緩沖培養(yǎng)基的平皿中,將其放在中央。
 
  3、將培養(yǎng)皿放在顯微鏡載物臺(tái)上,盡量將蓋玻片上所畫(huà)圓圈的一個(gè)對(duì)準(zhǔn)光照的中心區(qū),這時(shí)光的亮度較好。
 
  4、用低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)細(xì)胞調(diào)焦。
 
  5、將針頭推入視野中心,在視野中針頭呈陰影狀。
 
  6、輕輕的落下針頭,直至到達(dá)培養(yǎng)基中后停下。
 
  7、通過(guò)顯微鏡觀察,移動(dòng)針頭,必要時(shí)調(diào)整微操作儀,直到針頭的陰影在視野的上方。然后確定針頭的位置,使其約處在視野中心。
 
  8、輕輕下調(diào)針頭,直到針頭變得清晰一些
 
  9、調(diào)到工作放大倍數(shù),調(diào)準(zhǔn)細(xì)胞焦距,找到針尖。
 
  10、如果找不到,重新使用低倍鏡,盡量將針頭調(diào)到視野的中心,重復(fù)上述的步驟。
 
  11、小心下調(diào)針尖,直到其*聚焦。

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