快速掌握顯微注射儀的使用秘籍!
閱讀:2148 發(fā)布時間:2021-5-19
顯微注射儀采用顯微操作系統(tǒng)(倒置顯微鏡/體視顯微鏡+顯微操作器)將供體物(基因、細胞核或細胞其他成分)直接注入宿主細胞(去核卵母細胞、胚胎細胞或體外培養(yǎng)的細胞)中,研究供體物的功能或者獲得轉基因動植物的技術。
顯微注射儀的操作過程:
一、針頭裝液:
1、使用無菌的微量加樣器從微注射針頭的后部加入0.5~1μl的注射樣品。
2、使用玻璃毛細管拉出毛細管針頭,里面有與毛細管平行的細絲,有利于液體從后部向針頭方向運動。只需在針頭后部浸入1mm深度,不需使用手指或其他東西接觸,就足以使少量的樣品到達針尖部。
二、針頭定位:
1、將裝液后的針頭的游離端安在連接器上,然后旋緊連接器以固定針頭,再將其固定到微操作儀的托針管上。
2、把載有待注射細胞的蓋玻片轉移到里面有緩沖培養(yǎng)基的平皿中,將其放在中央。
3、將培養(yǎng)皿放在顯微鏡載物臺上,盡量將蓋玻片上所畫圓圈的一個對準光照的中心區(qū),這時光的亮度較好。
4、用低倍物鏡對準細胞調焦。
5、將針頭推入視野中心,在視野中針頭呈陰影狀。
6、輕輕的落下針頭,直至到達培養(yǎng)基中后停下。
7、通過顯微鏡觀察,移動針頭,必要時調整微操作儀,直到針頭的陰影在視野的上方。然后確定針頭的位置,使其約處在視野中心。
8、輕輕下調針頭,直到針頭變得清晰一些
9、調到工作放大倍數,調準細胞焦距,找到針尖。
10、如果找不到,重新使用低倍鏡,盡量將針頭調到視野的中心,重復上述的步驟。
11、小心下調針尖,直到其*聚焦。