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天津博達宏力科技發(fā)展有限公司

美國奧豪斯離心機怎么樣

時間:2020-9-2閱讀:2262
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美國奧豪斯離心機怎么樣,介紹如下:

       

        1. 取含有噬菌粒的TG1菌種1ml (菌數(shù)目為1E10)加入含有100ml 2xYT-GA培養(yǎng)基250ml搖瓶中,使用奧豪斯搖床37度220rpm搖菌搖床至OD600為約0.5。
    
        2. 取OD600為約0.5的菌液20ml (菌數(shù)目為1E10),按照MOI為20:1加入pfu為2E11的輔助噬菌體M13 K07,37度220rpm振蕩半小時進行感染。
    
        3. 取感染后菌液到50ml離心管使用奧豪斯離心機5816R 3200g離心10分鐘,去除培養(yǎng)基,以除去培養(yǎng)基中的葡萄糖對噬菌粒中p3蛋白融合了抗體片段蛋白表達的抑制。
    
        4. 用2xYT-AK培養(yǎng)基重懸菌團,將培養(yǎng)基加至400ml,用1L搖瓶在30度220rpm過夜搖菌。
    
        5. 將400ml菌液均分至大的離心瓶中,使用奧豪斯離心機5816R 10000g離心10分鐘,取上清,10000g再次離心10分鐘,去除殘留的菌體碎片。
    
       6. 取90ml PEG溶液加入400ml上清液中,在4℃孵育1小時并伴隨著柔和的振蕩,然后使用帶低溫控制功能的奧豪斯離心機5816R 4℃10000g離心1小時。
    
       7. 去上清,用10mlPBS重懸噬菌體后,加入2.5ml PEG溶液再次沉淀.
    
       8. 冰上孵育20分鐘,然后使用帶低溫控制功能的奧豪斯離心機5816R 4℃ 10000g離心半小時。
    
       9. 去上清液,用吸水紙吸干殘留的PEG溶液,加入1-2ml的PBS重懸噬菌體,進行滴度測定。

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