一、載體構(gòu)建的基本實驗步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測序驗證及結(jié)果交付

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動物表達(dá)載體；報告基因載體等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。