1、選用生長(zhǎng)情況好，數(shù)量較多的原代細(xì)胞，凍存前一天換液一次。
2、貼壁細(xì)胞需用 0.25％胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來，將細(xì)胞懸液收集至離心
管中。
3、1000rpm 離心 5 分鐘，棄上清液。
4、沉淀加含 DMSO 的培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)，調(diào)整至（1-10）×10
6/ml。
5、將懸液分至凍存管中，每管 1 ml。
6、密封凍存管，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類，凍存日期。
8、按下列順序降溫：室溫→4℃（20 分鐘〕→冰箱冷凍室（30 分鐘）→超低溫
冰箱（－80℃過夜）→液氮。