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細胞學(xué)堂 | 手把手教你培養(yǎng)SV-HUC-1

閱讀:1510      發(fā)布時間:2023-11-14
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SV-HUC-1 (人輸尿管上皮永生化細胞),是由猿猴空泡病毒40轉(zhuǎn)染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細胞,而建立起來的永生化細胞系。其分化特性與正常細胞相似,培養(yǎng)簡單,可無限傳代,卻不屬于腫瘤細胞[1]。



基礎(chǔ)信息


?

生長培養(yǎng)基:

Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S

?

生長特性:貼壁,上皮細胞樣

?

推薦傳代比例:1:2-1:4

?

推薦換液頻率:2~3次/周

?

培養(yǎng)條件:

氣相:空氣,95%;CO2,5%

溫度:37℃

?

凍存條件:

55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO


SV-HUC-1細胞正常生長

SV-HUC-1細胞正常生長


細胞傳代


01

從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄;

02

PBS沖洗細胞(每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL 溶液)。從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液,以避免攪動細胞層,前后輕柔搖晃容器數(shù)次;

03

從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養(yǎng)瓶中加入0.25%胰酶(試劑量應(yīng)足以覆蓋細胞層);

04

輕輕搖晃容器,使試劑*覆蓋細胞層,T25 細胞培養(yǎng)瓶留 200μL左右即可;

05

將培養(yǎng)容器放在培養(yǎng)箱中孵育5分鐘左右,在顯微鏡下觀察細胞解離情況;

06

當(dāng)細胞解離程度≥ 90%時,傾斜培養(yǎng)容器,使細胞上液體盡快流盡,加入所用胰酶兩倍體積的*培養(yǎng)基,吹打細胞層表面數(shù)次,使培養(yǎng)基分散;

07

將細胞轉(zhuǎn)移到無菌離心管中,以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘;

08

用最少體積的*培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將細胞懸液按照推薦比例稀釋,并將適量體積的細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中,再將細胞放回培養(yǎng)箱。


注意事項


1、待細胞匯合度達到80%-90%時,即可進行傳代培養(yǎng);

2、該細胞較難消化,注意延長消化時間。待消化到細胞收縮變圓,輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊,細胞可以滑落方可終止消化;

3、如果使用培養(yǎng)瓶,在將其放入培養(yǎng)箱前,應(yīng)將瓶蓋旋松,以便進行充分的氣體交換,除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋。


參考文獻


[1] 王惠惠, 陳鋒, 朱佳玉, 席淑華, 孫貴范. 亞砷-酸鈉對SV-HUC-1細胞NRF2通路影響[J]. 中國公共衛(wèi)生, 2017, 33(1): 95-97.




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