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   大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞分離自乳腺組織；乳腺是復(fù)管泡狀皮膚腺，主要由腺上皮細(xì)胞組成，并具有特殊的泌乳功能。在妊娠期，導(dǎo)管末梢發(fā)育成腺泡；近年來的許多研究都表明乳腺癌、乳腺炎等的發(fā)生都與乳腺上皮細(xì)胞(MEC)有密切聯(lián)系，體外分離培養(yǎng)MECs即成為研究開展的關(guān)鍵步驟。乳腺是乳房的腺體組織，乳腺由導(dǎo)管和腺泡組成，腺泡是分泌乳汁的重要部分。乳腺的正常發(fā)育是由體內(nèi)激素和局部合成的生長因子共同調(diào)控，其中乳腺表達(dá)的生長因子對乳腺上皮細(xì)胞的增殖、分化、凋亡產(chǎn)生極大的影響。乳腺上皮細(xì)胞分離自分娩后3-5天的乳腺組織，為貼壁生長型細(xì)胞，呈多角形、圓形以及短梭形；乳腺上皮細(xì)胞主要功能即生乳功能。

　　大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法：

　　1.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　2.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　3.將細(xì)胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　大鼠原代乳腺上皮細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

　　1.細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

　　2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

　　3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。