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Axion CytoSMART Lux3箱內(nèi)全自動活細(xì)胞成像系統(tǒng)（原Lonza CytoSMART活細(xì)胞成像儀），為荷蘭進口細(xì)胞成像儀，體積小巧，可方便地用于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，在明場、熒光通道下對細(xì)胞培養(yǎng)進行監(jiān)測，并通過拍攝高品質(zhì)細(xì)胞圖像、延時攝影、快速可靠的數(shù)據(jù)處理軟件，實現(xiàn)對樣本形態(tài)及行為變化的實時可視化分析。



 

CytoSMART Lux3細(xì)胞成像儀優(yōu)勢

1、體積小巧

所有硬件和電子器件都能在5~40°C及20~95%的濕度環(huán)境下運行。更小尺寸，重量1.3kg，箱內(nèi)移動無壓力，空間占用少。

2、操作簡單

step-by-step引導(dǎo)式實驗流程設(shè)定，點擊即自動呈現(xiàn)數(shù)據(jù)、圖片或影像，照片上傳國內(nèi)云端服務(wù)器，進行圖像數(shù)據(jù)分析。即插即用，無需安裝調(diào)試，無易損模塊，無需維護。

3、高品質(zhì)圖片

LED光源位于樣本上方，數(shù)據(jù)采集由樣本臺下方的可變焦鏡頭完成，640萬像素CMOS成像，10倍鏡下0.7μm/像素的超高分辨率，只使用CMOS 67%的核心區(qū)域成像，避免畸變困擾。

4、方便拓展

可多臺并聯(lián)，提升實驗通量和平臺共享能力。一拖四，單臺終端即能實現(xiàn)實驗室集約管理。

5、兼容各類細(xì)胞培養(yǎng)容器

可使用任何高度小于55mm（樣本臺到光源下沿的距離）的透明培養(yǎng)容器，如6~384孔多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、T25~T225培養(yǎng)瓶等。

 

 

CytoSMART Lux3細(xì)胞成像儀應(yīng)用

支持明場、以及紅色和綠色熒光雙通道細(xì)胞計數(shù)，可對樣本中被熒光標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量和大小進行定量計算，并開展長期追蹤。

1、轉(zhuǎn)染與轉(zhuǎn)導(dǎo)

CytoSMART Lux3優(yōu)秀的成像能力和機器學(xué)習(xí)算法，可對熒光報告基因載體的表達進行直接觀測和定量測定。
 


實驗樣本為HepG2細(xì)胞，使用了BacMam表達系統(tǒng)進行轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過圖像數(shù)據(jù)自動分析，軟件給出了細(xì)胞覆蓋度和熒光標(biāo)記計數(shù)的實時結(jié)果。藍色對應(yīng)整體樣本，綠色和紅色對應(yīng)其中表達了BacMam-Actin-GFP及/或BacMam-Nucleus-RFP的那部分細(xì)胞。可以看到從轉(zhuǎn)染后第7小時開始，紅色和綠色熒光蛋白的表達一直呈現(xiàn)迅速升高的趨勢，且過夜以后仍然未見衰退，雖然此時細(xì)胞的增殖已經(jīng)進入平臺期。而且轉(zhuǎn)導(dǎo)表達會先發(fā)生在細(xì)胞骨架中，那里表達的蛋白量也高于細(xì)胞核。這些數(shù)據(jù)結(jié)合影像，提供了綜合性的轉(zhuǎn)導(dǎo)質(zhì)控依據(jù)。
 



 

2、細(xì)胞匯合變化 

支持在2D培養(yǎng)體系中計算被細(xì)胞覆蓋的表面占比，提供高效、保真的細(xì)胞匯合度分析?；趫D像的自動捕獲及計算，自動生成報告展示細(xì)胞覆蓋度（%，成像范圍內(nèi)總的細(xì)胞覆蓋度，當(dāng)使用熒光成像時，分別給出紅色及綠色熒光的覆蓋度）、匯合比例（%，發(fā)出綠色及紅色熒光物體各自的覆蓋度）數(shù)據(jù)。應(yīng)用于在無標(biāo)記或熒光標(biāo)記實驗中計算細(xì)胞匯合度、確定合適的細(xì)胞傳代時間點以維持細(xì)胞表型及培養(yǎng)質(zhì)量、藥物處理后細(xì)胞匯合度及活力評估、設(shè)定提醒內(nèi)容告知何時完成細(xì)胞傳代等。CytoSMART Lux3自動對細(xì)胞活力和增殖過程進行追蹤并給出定量分析，提高實驗的效率和可重復(fù)性。
 


 

3、劃痕/遷移跟蹤

支持觀察劃痕實驗，可在實驗全程中無標(biāo)記地檢測細(xì)胞的遷移，實時觀察并定量檢測傷口閉合或者是細(xì)胞侵襲的過程，以評估藥物處理及條件改變對于遷移過程中細(xì)胞的影響等。系統(tǒng)可自動選定無細(xì)胞區(qū)域（即劃痕），并定量計算該缺口閉合及細(xì)胞遷移的速度，提供劃痕面積（μm2，變化中的劃痕面積）、速度（μm2/s，細(xì)胞遷移速度）等數(shù)據(jù)。
 


 

4、細(xì)胞凋亡

結(jié)合特定凋亡通路的熒光標(biāo)記，Lux3可以在監(jiān)控樣本動態(tài)變化的過程中，提示凋亡事件發(fā)生的時間順序或通路依賴性。
 


綠色熒光染料pSIVA-IANBD能結(jié)合外翻的細(xì)胞膜中磷脂酰（PS），從而提示早期的凋亡發(fā)生；而PI則是常用的細(xì)胞核紅色熒光染料，它能指示凋亡過程的終結(jié)。在兩組CHOK-1細(xì)胞樣本中加入上述兩種熒光染料后，并聯(lián)使用兩臺Lux3，進行了間隔為10分鐘的連續(xù)攝像并一直持續(xù)到第24小時。圖中的上層為空白對照組的延時成像結(jié)果，下層為同時間點經(jīng)0.6mM H2O2處理發(fā)生了細(xì)胞凋亡的實驗組的成像結(jié)果。通過對熒光區(qū)域的定量識別，CytoSMART云端計算能分析得到并自動生成兩個樣本各自的凋亡指數(shù)曲線，為凋亡研究提供重要的判斷依據(jù)。
 


5、單細(xì)胞示蹤

在ibidi μ-Slide channel板中觀察細(xì)胞對FBS的濃度變化是否做出趨向性運動。HeLa細(xì)胞上樣時培養(yǎng)基中FBS的濃度為10%。在相鄰的兩個Channel中則分別添加20%和0% FBS濃度的同種培養(yǎng)基，在這樣的FBS濃度梯度環(huán)境中，細(xì)胞是可以移動的。另設(shè)一塊趨化板作為對照組，其中不同部位的FBS濃度均為10%。該實驗并聯(lián)使用了兩臺Lux 3，以每5分鐘拍攝一次的頻率連續(xù)采樣24小時。隨后以圖片為原始數(shù)據(jù)，使用CytoSMART單細(xì)胞識別功能及第三方軟件的追蹤功能，來對每個細(xì)胞的運動軌跡進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HeLa細(xì)胞在FBS濃度恒定的環(huán)境中會在更大范圍內(nèi)做均勻分散；而在具有FBS濃度差的環(huán)境中，其運動范圍則更為集中，而且存在向更高濃度區(qū)域運動的傾向。
 

 

 

參考文獻

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