成纖維細(xì)胞比心肌細(xì)胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細(xì)胞間中仍有少數(shù)成纖維細(xì)胞混雜，如果處理不當(dāng)，很容易長(zhǎng)成優(yōu)勢(shì)細(xì)胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細(xì)胞有絲分裂，因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細(xì)胞。
觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時(shí)，接種密度低，貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細(xì)胞隨著液體的更換而被丟棄，液體的更換應(yīng)在接種48小時(shí)后進(jìn)行。這不僅會(huì)顯著增加貼壁心肌細(xì)胞的數(shù)量，還會(huì)使BrdU需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)抑制成纖維細(xì)胞。另外，其和0.1gL1BSA能為心肌細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)支持，但對(duì)心肌細(xì)胞的黏附率和凋亡率無(wú)明顯影響。
除無(wú)菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外，還應(yīng)特別注意以下幾點(diǎn)：獲取心臟時(shí)，避免切開(kāi)消化道。比較安全的方法是切開(kāi)劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機(jī)會(huì)。在條件允許的情況下，避免新生大鼠心肌細(xì)胞與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)，防止交叉污染。培養(yǎng)心肌細(xì)胞的觀察。
原代心肌細(xì)胞間培養(yǎng)液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)注意：
1、過(guò)濾后pH值會(huì)增加0.1~0.3。
2、培養(yǎng)基中加入血清后，pH值會(huì)降低，降低的程度與血清的質(zhì)量和含量有關(guān)。
3、及時(shí)更換液體。
4、配制好的培養(yǎng)液不宜在4℃下長(zhǎng)期保存。這是因?yàn)榕囵B(yǎng)液中的CO2會(huì)溢出，培養(yǎng)液的pH會(huì)升高。每種配制好的培養(yǎng)液應(yīng)盡可能在2周內(nèi)用完，否則應(yīng)部分保存在-20℃下。使用前要補(bǔ)充谷氨酰胺和碳酸氫鈉，再次過(guò)濾后才能使用。
