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熒光分光光度計維生素C含量測定上的應用
依據(jù)國家標準GB 5413.18-2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定》，應用天津博精CMF-300型熒光分光光度計對嬰幼兒乳品中維生素C的含量進行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便，線性良好是測定食品中維生素C含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 維生素C 抗壞血酸 食品 嬰幼兒乳品
· 原理
維生素C（抗壞血酸）在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸，它與鄰苯二胺（OPDA）反應生成熒光物質(zhì)（喹唔啉），用熒光分光光度計測定其熒光強度，其熒光強度與維生素C的濃度成正比。
脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物不與鄰苯二胺反應，以此排除試樣中熒光雜質(zhì)產(chǎn)生的干擾。
· 實驗條件
儀器及附件：
CMF-300型熒光分光光度計
熒光石英比色皿
分析條件：
激發(fā)波長：350nm
發(fā)射波長：430nm
藥品：
淀粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、鹽酸、亞鐵氰化鉀、結(jié)晶乙酸鈉、硼酸、鄰苯二胺、維生素C標準品。
其它：
分析天平（0.0001g）、烤箱、水浴鍋、80～200目篩子、研缽、抽濾裝置、稱量紙、藥勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏斗、濾紙、移液管、具塞比色管、燒杯、擦鏡
紙、玻璃棒、膠頭滴管等。
· 實驗流程
樣品前處理：
樣品前處理步驟如下圖所示：
圖1 樣品前處理流程圖
備注：樣品稱樣量依據(jù)其本身維生素C含量（約2mg）而定。淀粉酶活力為1.5U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)節(jié)用量。
樣品待測液制備：
樣品經(jīng)前處理后還需進行進一步的處理才可以上機進行檢測。
樣品待測液制備步驟如下圖所示：
圖2 樣品空白溶液待測液和樣品溶液待測液配制流程圖
備注：樣品稱樣量依據(jù)其本身維生素C含量（約2mg）而定。淀粉酶活力為1.5U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)節(jié)用量。
標準樣品待測液制備:
精密稱取0.050g維生素C標準品，用偏磷酸-乙酸溶液A溶解并定容至50mL，再準確吸取10.0mL該溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀釋并定容至100mL，配制成100μg/mL的標準溶液。
準確吸取經(jīng)過處理的VC標準溶液（10μg/mL）0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL試管中，補水至2.0mL，配制成VC標準樣品工作液。再分別加入5mL鄰苯二胺（OPDA）溶液，搖勻避光靜置60min，即配制成VC標準樣品待測液。
標準樣品待測液制備步驟如下圖所示：
圖3 VC標準空白溶液待測液和VC標準系列溶液待測液配制流程圖
· 測定結(jié)果
式中：
X——試樣中維生素C的含量，單位為毫克每百克（mg/100g）；
V——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；
c——由標準曲線查得的試樣測定液中維生素C的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；
f——試樣稀釋倍數(shù)。
· 結(jié)論
采用熒光分光光度法測定食品中維生素C含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。
由于維生素C本身易光解而且在測定過程中需要對每一種樣品進行樣品的背景扣除，因此，此實驗對儀器的功能要求更高。CMF-300型熒光分光光度計在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置，從而避免了樣品被強光的直接照射；軟件上采用了的雙背景扣除功能，自動計算維生素C濃度，使整個實驗操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。