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核酸內(nèi)切酶的簡單應(yīng)用

閱讀:2065      發(fā)布時間:2022-11-11
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  一、核酸內(nèi)切酶(endonuclease)在核酸水解酶中,為可水解分子鏈內(nèi)部磷酸二酯鍵生成寡核苷酸的酶,與核酸外切酶相對應(yīng)。從對底物的特異性來看,可分為DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶;RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。一般來說,大都不具堿基特異性,但也有諸如脾臟RNase、RNaseT1等或限制性內(nèi)切酶那種能夠識別并切斷特定的堿基或堿基序列的酶。
 
  二、原理作用:
 
  (1)限制性酶切反應(yīng)速度與底物的性質(zhì)有很大的關(guān)系,底物的單雙鏈結(jié)構(gòu)、分子的構(gòu)型、DNA鏈中酶識別位點的數(shù)目以及位點附近的序列等都影響著酶的催化反應(yīng)。共價閉合環(huán)(超螺旋構(gòu)型)DNA比其相應(yīng)的線性分子的酶解作用要慢,要使超螺旋構(gòu)型DNA降解,需要的酶量就大。
 
  (2)對于DNA-RNA雜合雙鏈的酶切作用,Molloy等用EcoRI等8種酶切時,結(jié)果其DNA鏈可被切割,但酶用量比雙鏈DNA大20-50倍。部分限制性酶還可切割單鏈DNA,如HaeⅢ等。
 
  三、分類:
 
  (1)Ⅰ型限制酶為復(fù)合功能酶,具有限制-修飾兩種功能,但在DNA鏈上沒有固定的切割位點,一般在離切割位點1kb到幾kb的地方隨機切割,不產(chǎn)生特異性片段。
 
  (2)Ⅲ型酶與Ⅰ型酶基本相似,不同的是Ⅲ型酶有特異性的切割位點,但這兩類酶對DNA酶切分析的意義不大,通常所說的限制性內(nèi)切酶是指Ⅱ型酶,它能夠識別與切割DNA鏈上的特定的核苷酸順序,產(chǎn)生特異性的DNA片段。

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