一、DH5α
DH5α是大腸桿菌(Escherichia coli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計成對外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對于吸收外源DNA特別有效，這使得它們在基因工程和分子生物學(xué)研究中成為常見的實(shí)驗(yàn)室工具。
二、操作步驟
1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜（約16小時）；
2、取1ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100ml LB培養(yǎng)基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)約2.5-3小時（250-300rpm）；
3、將0.1M CaCl2溶液置于冰上預(yù)冷；以下步驟需在超凈工作臺和冰上操作；
4、吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；
5、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；
6、棄去上清，加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動打勻，使細(xì)胞重新懸浮，在冰放置20分鐘；
7 、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；
8 、棄去上清，加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動打勻，使細(xì)胞重新懸??；
9 、細(xì)胞懸浮液可立即用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)或添加冷凍保護(hù)劑（15% - 20%甘油）后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆茫ǎ?/span>70℃）。
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