CHO殘留DNA的相關(guān)規(guī)定及要求

在預(yù)防及治療性蛋白制品的生產(chǎn)中，即使經(jīng)歷嚴(yán)格的純化和質(zhì)控，最終產(chǎn)品仍然會(huì)受到來(lái)自動(dòng)物、細(xì)菌和酵母等宿主細(xì)胞的殘留DNA（Residual host cellular DNA）污染，這些殘留DNA以碎片化形式存在并可能產(chǎn)生潛在的致癌性、免疫原性和感染性等風(fēng)險(xiǎn)。為了保證生物制品的安全性，建立精準(zhǔn)可控的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)方法十分重要。

世界衛(wèi)生組織（WHO）、美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）、歐盟（EU）均對(duì)每劑量生物制品宿主殘留DNA含量做出了規(guī)定，根據(jù)材料來(lái)源和生產(chǎn)工藝，一般允許生物制劑存在100 pg/劑量以下的宿主細(xì)胞殘留DNA，最高允許達(dá)到10 ng/劑量，《中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）》第三部規(guī)定以動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)的生物制劑中殘留DNA不超過100 pg/劑量，以細(xì)菌真菌生產(chǎn)的生物制劑中殘留DNA不超過10 ng/劑量。殘留DNA的片段化程度是生物制劑安全性的另一重要指標(biāo)，一定長(zhǎng)度的殘留DNA存在整合致癌風(fēng)險(xiǎn)，世界各國(guó)藥物監(jiān)管機(jī)構(gòu)都要求盡可能降低殘留DNA的片段長(zhǎng)度，如WHO和FDA要求宿主細(xì)胞殘留DNA長(zhǎng)度不超過200 bp。

中美兩國(guó)藥典均規(guī)定，DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR法作為檢測(cè)宿主細(xì)胞殘留DNA的典型方法，其中相比于探針雜交和熒光染色法，定量PCR法以其靈敏度、準(zhǔn)確性、省時(shí)等特征，得到了最為廣泛的應(yīng)用，并由此開發(fā)了一系列針對(duì)特定宿主細(xì)胞的前處理及檢測(cè)試劑盒。