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關(guān)于細胞培養(yǎng)瓶的相關(guān)知識

閱讀:659        發(fā)布時間:2023-6-7
  一、細胞的附著和生長
 
  在人工附著物上,大多數(shù)離體培養(yǎng)的脊椎動物細胞呈單層生長,因此,附著物必須帶有適合細胞附著或至少適合附著因子吸附的合適電荷,附著因子可促進細胞的附著和鋪展。雖然造血細胞系、嚙齒動物的腹水瘤細胞和少數(shù)其他選擇細胞系,如人小細胞肺癌(Carne et al.,1981)可在懸浮條件下自發(fā)生長;但許多轉(zhuǎn)化細胞系也可以使它們能在懸浮條件下生長,因此,它們的生長并不依賴附著物的表面電荷。然而,大多數(shù)正常細胞增殖前,需要在附著物上鋪展 ,附著不好或過度密集造成鋪展不充分時,可抑制細胞增殖。需要附著才能生長的細胞被稱為貼壁依賴性(achorage dependent)細胞。轉(zhuǎn)化的細胞常表現(xiàn)出非貼壁依賴性(achorage independent),它們能在振蕩培養(yǎng)條件下進行懸浮生長,或在半固體培養(yǎng)基如軟瓊脂上進行生長。
 
  、常見的細胞附著材料
 
  一次性塑料
 
  一次性的無菌聚丙乙烯培養(yǎng)瓶是簡單的、易生產(chǎn)的培養(yǎng)細胞附著物。它們的透光性好、生長面平滑、質(zhì)地均勻、易于生產(chǎn)。從制作工藝角度講,聚丙乙烯是疏水性的,表面不適合細胞生長,因此,用于組織培養(yǎng)的塑料要經(jīng)Y射線照射、化學(xué)處理或電離輻射,以產(chǎn)生親水的帶電表面。
 
  玻璃
 
  因其光學(xué)特性和表面電荷而成為最早使用的細胞附著物,但現(xiàn)在的大多數(shù)實驗室里,玻璃已被合成塑料(一般為聚丙乙烯)所取代,因為合成塑料具有較大的韌性和優(yōu)良的光學(xué)特性,雖然玻璃制品有便宜、易清洗、能保持支持細胞生長特性、可進行干熱和濕熱滅菌、透光性好等優(yōu)點。只有用強堿(如NaOH或腐蝕性去污劑)處理,然后酸洗中和的玻璃才適于培養(yǎng)細胞 。透光性強的玻璃呈堿性,通常含鉛量高而可能減慢細胞生長。因此,載玻片和蓋玻片需用酸洗或涂層以達到好的效果。
 
  三、細胞培養(yǎng)系統(tǒng)
 
  (1)固定的單層培養(yǎng)物,生長在不受干擾的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿和多孔板中。這些是最容易使用的培養(yǎng)系統(tǒng),需要的設(shè)備最少。然而,這些系統(tǒng)對于生產(chǎn)大量的細胞來說是非常耗費人力的。
 
  (2)移動的單層培養(yǎng)物,主要生長在滾筒瓶中。這些容器在電動架或鼓上緩慢旋轉(zhuǎn)(大約0.5rpm到1rpm),廣泛用于生產(chǎn)大量的細胞。 滾筒瓶采用簡單的技術(shù),但需要投資于適當?shù)脑O(shè)備。
 
  (3)固定的懸浮培養(yǎng)物,在未經(jīng)處理的培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶中生長,不需要攪拌。
 
  (4)在機械攪拌的容器(旋轉(zhuǎn)瓶)、生物反應(yīng)器或發(fā)酵罐中生長的移動懸浮培養(yǎng)物。這些系統(tǒng)在空間、勞動力和培養(yǎng)基方面是經(jīng)濟的; 因此,攪拌懸浮培養(yǎng)通常是實驗室和工業(yè)界生產(chǎn)大量細胞的方法。許多貼壁依賴細胞可以被改造成在微載體上生長,以利用這些系統(tǒng)的優(yōu)勢。

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