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siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染試劑

MCE 國(guó)際站：siRNA/miRNA Transfection Reagent

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲(chǔ)條件： -20°C，1 年避免反復(fù)凍融

簡(jiǎn)介：MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 是一種陽(yáng)離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于 siRNA 和 miRNA 的轉(zhuǎn)染。

概述：RNA 干擾 (RNA interference, RNAi)是指小分子雙鏈 RNA 能夠特異性地降解同源的 mRNA，從而抑制或關(guān)閉相應(yīng)基因表達(dá)的現(xiàn)象。使用 RNAi 技術(shù)設(shè)計(jì)針對(duì)致病基因 mRNA 的小分子干擾 RNA (Small interfering RNA, siRNA)，可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)。MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 是一種陽(yáng)離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于 siRNA 和 miRNA 的轉(zhuǎn)染。外源 siRNA/miRNA 與轉(zhuǎn)染試劑形成穩(wěn)定復(fù)合物，通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞，隨后在胞質(zhì)釋放出 siRNA/miRNA，實(shí)現(xiàn)siRNA/miRNA 的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。MCE siRNA/miRNA Transfection Reagent 具有以下優(yōu)點(diǎn)：適用范圍廣：可作用于多種細(xì)胞系，適合 siRNA/miRNA 介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染效率高：高效轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞，細(xì)胞存活率高。細(xì)胞毒性低：能較好平衡高轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞活力，作用溫和。操作簡(jiǎn)便：實(shí)驗(yàn)方案簡(jiǎn)單快速，結(jié)果穩(wěn)定可靠，轉(zhuǎn)染后無(wú)需去除復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基。

描述：

RNA干擾（RNAi）是指能夠特異性降解同源mRNA，抑制或關(guān)閉相應(yīng)基因表達(dá)的小雙鏈RNA。利用RNAi技術(shù)設(shè)計(jì)針對(duì)致病基因mRNA的小干擾RNA（siRNA），可以特異性地敲除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)。

MCE siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染試劑是一種新型陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，用于siRNA和miRNA的轉(zhuǎn)染。外源性的siRNA/miRNA與轉(zhuǎn)染試劑形成穩(wěn)定的復(fù)合物，通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，在胞漿中釋放出siRNA/miRNA，實(shí)現(xiàn)siRNA/miRNA的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。

MCE siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染試劑的特點(diǎn)

應(yīng)用范圍廣：在多種常見(jiàn)細(xì)胞類型中均有較高的轉(zhuǎn)染效率，適用于siRNA/miRNA介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。

轉(zhuǎn)染效率高：可高效轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞，且細(xì)胞活力高。

細(xì)胞毒性低：作用溫和，生物相容性好。

操作簡(jiǎn)單：轉(zhuǎn)染后無(wú)需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。

操作說(shuō)明：1.準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞(1)貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將消化后的細(xì)胞按照 0.1-1 × 105 個(gè)細(xì)胞/孔鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為 30%-40%。(2)懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，先進(jìn)行細(xì)胞鋪板，每 500 μL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入 0.5-2.5 × 105 個(gè)細(xì)胞注：為提高轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長(zhǎng)狀態(tài)良好且生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染2.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物(1)取 1 μL siRNA/miRNA (20 μM，DEPC 水溶解) 加入到 1.5 mL 離心管中，加入 2 μL siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑與 siRNA/miRNA 混合，室溫靜置孵育 3 min。注：最佳轉(zhuǎn)染條件因細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件不同而有所區(qū)別，可做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染比例。建議選取 siRNA/miRNA 作用濃度在 10-100 nM 之間，轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù) siRNA/miRNA 濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整注：細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，可根據(jù)實(shí)際情況參考上表進(jìn)行等倍放大。(2)加入 100 μL 減血清培養(yǎng)基（無(wú)血清無(wú)雙抗），輕柔混勻，室溫靜置孵育 30 min，即形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。3.細(xì)胞轉(zhuǎn)染孵育結(jié)束，將轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物 (100 μL) 加入每孔細(xì)胞，輕柔混勻，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。4.分析轉(zhuǎn)染效率轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng) 24-48 h 后，可使用熒光檢測(cè)法、Western Blot、ELISA、RT - PCR、流式細(xì)胞術(shù)、報(bào)告基因等檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，或進(jìn)行后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)

注意事項(xiàng)：1.為了獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，建議選用經(jīng)過(guò) PAGE 純化和脫鹽處理的高純度 siRNA/miRNA。2.細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，建議使用生長(zhǎng)狀態(tài)良好且生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率 > 90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。3.通常情況下，轉(zhuǎn)染復(fù)合物中 siRNA/miRNA (μL) 與 siRNA/miRNA Transfection Reagent (μL) 的比例為 1:2。為提高轉(zhuǎn)染效果，可在 1:1-1:3 范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。4.轉(zhuǎn)染過(guò)程中，抗生素的存在可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低及細(xì)胞毒性，不建議在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中添加抗生素。5.血清會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生一定程度的干擾，為提高轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染過(guò)程中，建議使用無(wú)血清培養(yǎng)基。6.影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，如細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)及密度、核酸質(zhì)量及濃度、轉(zhuǎn)染試劑與核酸比例等，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索最佳轉(zhuǎn)染條件。7.為避免 RNA 酶污染，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程使用無(wú) RNA 酶和無(wú)熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液等。8.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。9.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：EZ-482  | Theaflavin-3'-gallate  | NecroX-5  | AA147  | 2-Thenoyltrifluoroacetone  | Nalidixic acid  | SC144  | Citral  | MRK-016  | Zingiberene

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