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ELISPOT（Enzyme-linked Immunospot Assay）全名為酶聯(lián)免疫斑點檢測，結(jié)合了細胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，能夠檢測到單個細胞分泌的細胞因子情況。

ELISPOT 實驗使用 PVDF 膜為底的 96 孔板，包被上特異性的單克隆抗體來捕獲細胞分泌的細胞因子。在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測的細胞和抗原刺激物進行培養(yǎng)，在刺激物的刺激下，T細胞就會在對應(yīng)的時間段分泌對應(yīng)的細胞因子。細胞因子被包被在膜上的抗體所捕獲。洗去細胞，被捕獲的細胞因子可以與生物素標記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標親和素與生物素結(jié)合，進行化學酶聯(lián)顯色，就可以在膜的局部形成一個個圓形的斑點，每一個斑點就對應(yīng)了當初一個分泌細胞因子的細胞。統(tǒng)計膜上的斑點的數(shù)目，再除以當初加入孔內(nèi)的細胞總數(shù)，就可以計算出陽性細胞的百分比。