NobleRyder BC2568過氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨法) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產(chǎn)品貨號(hào)：BC2568

產(chǎn)品名稱：過氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨法) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/24S

過氧化氫酶CAT活性檢測(cè)試劑盒鉬酸銨法抗逆

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：過氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨法）

英文名稱：Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

規(guī)格：50T/24S

檢測(cè)方法：可見分光光度法 Spectrophotometer

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC2568過氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨法) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產(chǎn)品說明:

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H₂O₂清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H₂O₂可與鉬酸銨反應(yīng)形成穩(wěn)定的黃色復(fù)合物，在405nm處有強(qiáng)烈吸收峰，且其吸光值大小與過氧化氫濃度成

正比。通過測(cè)定反應(yīng)體系中剩余的H₂O₂量，得出被CAT催化分解的H₂O₂量，進(jìn)而反映CAT的活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備:

a、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清:按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W，超聲3s，間隔9s，重復(fù)30次):8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

b、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(V)=1:5~10(建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣本：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm，蒸餾水調(diào)零。

1、測(cè)定前將20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品與試劑一在25C水浴10min以上。

三、CAT活性計(jì)算

1、血清(漿)CAT活力的計(jì)算:

單位的定義:在25℃條件下，每mL血清(漿)每分鐘催化1μmolH₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mL)= (△A÷△A標(biāo)準(zhǔn))x20xV標(biāo)準(zhǔn)+V樣+TxF=10x(△A+△A標(biāo)準(zhǔn))xF

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:在25℃條件下，每mg組織蛋白每分鐘催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mg prot)=(△A+△A標(biāo)準(zhǔn))x20xV標(biāo)準(zhǔn)+(CprxV樣) +TxF=10x(AA÷AA標(biāo)準(zhǔn))÷CprxF

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算:

單位的定義:在25℃條件下，每g組織每分鐘催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/g質(zhì)量)=(△A+△A標(biāo)準(zhǔn))x20xV標(biāo)準(zhǔn)+(V 樣+V 樣總xW) +TxF=10x(△A+ΔA標(biāo)準(zhǔn)) ÷WxF

3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

單位的定義:在25℃條件下，每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1μmol H₂O₂降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/104cell)= (△A÷△A標(biāo)準(zhǔn))x20xV標(biāo)準(zhǔn)+(V樣+V樣總x500)+TxF=0.02x(△A÷△A標(biāo)準(zhǔn))xF

20:標(biāo)準(zhǔn)品濃度，20μmol/mL:V標(biāo)準(zhǔn):加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.3mL:V樣:加入樣本體積，0.06mL:T:反應(yīng)時(shí)間，10min:F:樣本稀釋倍數(shù):Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL;V樣總:加入提取液體積，1mL:W:樣本質(zhì)量，g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。

注意事項(xiàng):

1.本試劑盒多給出25mL的提取液，供樣本稀釋使用。

2.如果反應(yīng)液有大量氣泡產(chǎn)生，將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

3.如果樣本量過多，為保證反應(yīng)時(shí)間(25℃，10min)的準(zhǔn)確性，建議分成若干批次檢測(cè)，每批次檢測(cè)均需配1-2個(gè)空白管與標(biāo)準(zhǔn)管。

4.當(dāng)A測(cè)定小于0.12或者約等于A對(duì)照時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

5.動(dòng)物組織如肝臟、腎臟等酶活性較高樣本，預(yù)實(shí)驗(yàn)建議將樣本用提取液多個(gè)高倍稀釋(如25倍、50倍、100倍等)試驗(yàn)后，再進(jìn)行檢測(cè)。

過氧化氫酶CAT活性檢測(cè)試劑盒鉬酸銨法抗逆 

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

BC2568過氧化氫酶（CAT）活性檢測(cè)試劑盒（鉬酸銨法) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method） 50T/24S