總多糖含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

總多糖含量測(cè)定試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

多糖是生物體中廣泛存在的物質(zhì)，是一類由醛糖或酮糖通過(guò)糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物，它是生物體內(nèi)重要的生物大分子，是維持生命活動(dòng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)的基本物質(zhì)之一。

測(cè)定原理：

利用水提醇沉法提取總多糖，苯fen-硫酸法測(cè)定總多糖含量。

組成：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、無(wú)水乙醇、濃硫酸、蒸餾水、水浴鍋。

總多糖提取：

樣本烘干粉碎，稱取約 0.05g 樣本，加入 1ml 水，充分勻漿。100℃水浴提取 2h（必須蓋緊蓋子防止水分流失），冷卻后 10000g 離心 10min，取上清。吸取 0.2ml 上清，慢慢加入 0.8ml 無(wú)水乙醇，混勻后 4℃靜置過(guò)夜，10000g 離心 10min，棄上清，沉淀中加入 1ml 水，充分混勻溶解沉淀。

測(cè)定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 490nm。

2、吸取 200µl 上清，加入 100µl 試劑一和 0.5ml 濃硫酸，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻。取 200µl 加入酶標(biāo)板，于 490nm 下測(cè)定吸光值A(chǔ)。

總多糖含量計(jì)算：

以葡萄糖作為對(duì)照品，標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 7.981x - 0.0037，R2 = 0.9973，x 為葡萄糖含量（mg/ml），

y 為吸光值。

總多糖含量(μg/g 干重)= (A +0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000

=626.49×(A+0.0037) ÷W

V1：醇沉后重新溶解后的體積，1ml；V2：進(jìn)行醇沉的體積，0.2ml；V3，提取時(shí)加入水的體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；1000，mg 到μg 的換算系數(shù)。

總多糖含量測(cè)定試劑盒 糖代謝