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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

犬冠狀病毒（Canine coronavirus，CCoV）和貓冠狀病毒（feline coronavirus,FCoV）基因組結(jié)構(gòu)相似，均為α 冠狀病毒屬，單股正鏈 RNA 病毒。CCoV 和 FCoV 感染主要導(dǎo)致胃腸道病變，分子流行病學(xué)顯示，目前這兩種病毒在犬群和貓群中傳播廣泛，對(duì)寵物犬貓飼養(yǎng)者、從業(yè)愛好者及銷售者等危害巨大。

犬冠狀病毒感染犬只后主要引起消化道系統(tǒng)感染，通常死亡率不高，發(fā)病時(shí)表現(xiàn)為呼吸急促、精神不振、食欲下降，之后出現(xiàn)腹痛、腹瀉，糞便呈水樣并具有腥臭味，常伴有便血。貓冠狀病毒主要通過口鼻傳播，主要感染幼年和老齡貓。貓冠狀病毒主要包括兩種：貓腸道冠狀病毒（Feline enteric coronavirus,FECV）和貓傳染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis viurs,FIPV）。其中 FECV 的感染僅局限于消化道，致死率較低；FIPV 為高毒力突變株，致死率高，是目前最常見的致命性貓科病毒，發(fā)病時(shí)出現(xiàn)食欲下降、精神萎靡、體態(tài)消瘦和腹瀉的情況，滲出型腹膜炎的貓只還會(huì)伴有腹腔腫大的情況。

本試劑盒適用于檢測(cè)犬糞便樣本；貓 EDTA 抗凝全血、胸腹水、糞便樣本。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量，讓您的檢測(cè)結(jié)果更可信。

二、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化，具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到極微量的犬貓冠狀病毒核酸，不放過任何潛在的感染風(fēng)險(xiǎn)。

三、便捷操作

綜合各項(xiàng)指標(biāo)特性，研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測(cè)驗(yàn)證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測(cè)驗(yàn)證，適用于犬糞便樣本；貓 EDTA 抗凝全血、胸腹水、糞便樣本等多種常見樣本，滿足不同的檢測(cè)需求。

五、個(gè)性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)可為您提供個(gè)性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進(jìn)行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實(shí)際的檢測(cè)方案。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了犬貓冠狀病毒（CFCoV）熒光PCR檢測(cè)試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測(cè)需求。

七、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團(tuán)隊(duì)，在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

標(biāo)本采集

血樣：壓迫貓肘部前臂頭靜脈怒張，繃緊頭靜脈兩側(cè)皮膚，采樣針頭斜面朝上、呈 15°角由遠(yuǎn)心端向近心端刺入靜脈血管，見有血液回流時(shí)，緩慢抽取血液或接入 EDTA 抗凝真空采-血管。

胸腹水：應(yīng)采用燙烙法消毒采樣部位，用滅菌注射器經(jīng)燙烙部位插入，吸取內(nèi)部液體病料，然后將病料注入滅菌的試管中。

糞便：一般采集新鮮糞便，或采用棉拭子進(jìn)行直腸采樣或泄殖腔采樣。采集肛拭子樣品時(shí)，取無菌棉拭子插入畜禽肛-門或泄殖器腔中，旋轉(zhuǎn) 2 圈~3 圈，刮取直腸黏液或糞便，放入裝有 30%甘油磷酸鹽緩沖液（配制方法見 NY/T541-2016 獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范）中送檢。糞便樣品采集后應(yīng)低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室并盡快檢測(cè)，以防止樣品中待檢病原死亡、細(xì)菌增值或蟲卵孵化。

保存和運(yùn)輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h；若需長期保存，應(yīng)放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

將棉拭子充分捻動(dòng)、擠干后棄去拭子；糞便樣本加 PBS 充分混合，按照 1g 組織加 10 mL PBS 的比例配成懸液；將采集的全血加入 EDTA 抗凝劑后充分混合。樣品液經(jīng) 3000r/min 離心 10 min，取上清作為核酸檢測(cè)材料。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取， 請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑CFCoV 反應(yīng)液酶液

用量19μL1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，20μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇：

檢測(cè)通道（ReporterDye）FAM，淬滅通道（QuencherDye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光， 選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間收集熒光信號(hào)

11 cycle50℃10min否

21 cycle95℃2min否

345 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

6.檢測(cè)方法的局限性

1.樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

注意事項(xiàng)：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研。

選擇我們的犬貓冠狀病毒（CFCoV）熒光PCR檢測(cè)試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！