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RT-qPCR 在基因表達(dá)檢測及定量中使用極為廣泛。傳統(tǒng)的 RT-qPCR 雖然有一步法，但是涉及到樣本 RNA 提取，過程繁雜，影響因素較多，檢測通量很低。該試劑盒是免提取一步法 RT-qPCR 檢測試劑盒，細(xì)胞洗滌后，直接加裂解液裂解，裂解液直接用作模版進(jìn)行 RT-qPCR 擴(kuò)增，從細(xì)胞準(zhǔn)備到 PCR 結(jié)束可以在不到兩小時的時間內(nèi)完成，程序標(biāo)準(zhǔn)化，大大縮短了檢測時間及影響因素，大大增加了檢測通量。

本檢測試劑盒為探針法（TaqMan probe）, 正式檢測前 PCR 各參數(shù)需要先進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證，以保證檢測特異性及靈敏度。本檢測試劑盒不包括 DNA 酶處理，因?yàn)?DNA 酶處理存在消化不完全的可能，殘留 DNA 模板依然可能影響后期定量，同時 DNA 酶處理還存在滅活不完全的可能，殘留 DNA 酶活性可能影響后期 PCR 擴(kuò)增的 DNA 定量。因此，引物設(shè)計(jì)時需要以 RNA 序列為依據(jù)，擴(kuò)增產(chǎn)品需要至少覆蓋 2 個外顯子，確保擴(kuò)增系統(tǒng)不能以 DNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增，而只能以 RNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增。