HPLC分類

1、反相模式 (RP-LC)

2、反相離子對色譜 (IPC) 

3、正相模式 (NP-LC)
4、離子交換色譜 (IEC)

5、尺寸排阻色譜 (GPC / GFC)
 

反相模式 (RP)

填料：C18 (ODS)、C8 (octyl)、C4 (butyl)、苯基、TMS和氰基

相互作用力:

反相模式下流動相的選擇：

優(yōu)化水相（緩沖液）和有機相的比例非常重要（甲醇，乙腈和 THF 是常用的有機溶劑）

在有緩沖液的情況下, 緩沖液的濃度和pH值非常重要

增加流動相極性：

固定相極性變化對分離的影響：

固定相極性變化對分離的影響：

離子對色譜

離子對試劑

•陰離子化合物：氫氧化四丁基銨、溴化四丁基銨

•陽離子化合物：丁烷基磺酸鈉(C4)、戊烷基磺酸鈉(C5)、己烷基磺酸鈉(C6）、庚烷基磺酸鈉(C7)、辛烷基磺酸鈉(C8)、癸烷基磺酸鈉(C10)、十二烷基磺酸鈉(SDS)

離子對色譜影響因素

•離子對試劑的類型

•離子對試劑的濃度

•流動相的pH

正相色譜

色譜柱：

•硅膠柱:常用

•氰基柱: 常用

•氨基柱: 分析糖

•二醇基柱: 分析蛋白質(zhì)

相互作用力

氫鍵力

•如果樣品有

–-COOH: 羧基

–-NH2: 氨基

–-OH: 羥基

則氫鍵力強.

•如果樣品沒有任何官能團，象碳水化合物

•如果樣品有大的基團, 由于空間障礙

則氫鍵力弱.

正相模式下流動相的選擇：

•主要試劑：烷烴(戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷)、芳香烴(苯, 甲苯, 二甲苯)、二氯甲烷–氯仿

•輔助試劑：甲基-t-丁基醚(MTBE)、四氫呋喃(THF)、二氧雜環(huán)乙烷、嘧啶、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、異丙醇、乙醇、甲醇

為了調(diào)整保留時間，可以選擇主要試劑然后再加入輔助試劑。

增加流動相極性：

反相色譜與正相色譜的對比：

反相：保留時間重復(fù)性好、固定相耐用

正相：對立體異構(gòu)體有很好的分離(Vitamin E等)、保留時間重復(fù)性稍差

離子交換色譜：

離子交換色譜應(yīng)用：

生物領(lǐng)域(蛋白質(zhì), 農(nóng)藥, 氨基酸分析)

離子分析

陽離子交換劑：強陽離子交換劑(SCX)(R-SO3-)

弱陽離子交換劑(WCX) (R-COO-)

陰離子交換劑：強陰離子交換劑(SAX) (R4N+)

弱陰離子交換劑(WAX)(DEAE)

尺寸排阻色譜法（SEC）