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賽默飛色譜及質(zhì)譜

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液相色譜儀柱效項(xiàng)與色譜過程動(dòng)力學(xué)特性有關(guān)

閱讀：284 發(fā)布時(shí)間：2017-7-4

　　液相色譜儀的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

　　液相色譜儀柱效項(xiàng)與色譜過程動(dòng)力學(xué)特性有關(guān)，后兩項(xiàng)與色譜過程熱力學(xué)因素有關(guān)。

　　從基本分離方?？煽闯?，提高分離度有三種途徑：①增加塔板數(shù)。方法之一是增加柱長，但這樣會(huì)延長保留時(shí)間、增加柱壓。液相色譜儀更好的方法是降低塔板高度，提高柱效。②增加選擇性。當(dāng)α＝1時(shí)，R=0，無論柱效有多高，組分也不可能分離。一般可以采取以下措施來改變選擇性：a.改變流動(dòng)相的組成及PH值；b.改變柱溫；c.改變固定相。③改變?nèi)萘恳蜃?。這常常是提高分離度的zui容易方法，可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成來實(shí)現(xiàn)。k2趨于0時(shí)，R也趨于0；k2增大，R也增大。但k2 不能太大，否則不但分離時(shí)間延長，而且峰形變寬，會(huì)影響分離度和檢測靈敏度。一般k2 在1～10范圍內(nèi)，為2～5，窄徑柱可更小些。

　　液相色譜儀分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)（或稱交換系數(shù)），液相色譜儀凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。

　　在條件（流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時(shí)（Cs 、Cm很?。r(shí)，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減少，這時(shí)色譜峰為拖尾峰；而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度的增大，K也增大，這時(shí)色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能較少進(jìn)樣量，使組份在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時(shí)，才能獲得正常峰。

　　液相色譜儀在同一色譜條件下，樣品中K值大的組份在固定相中滯留時(shí)間長，后流出色譜柱；K值小的組份則滯留時(shí)間短，先流出色譜柱。混合物中各組份的分配系數(shù)相差越大，越容易分離，因此，混合物中各組份的分配系數(shù)不同是色譜分離的前提。在HPLC中，固定相確定后，K主要受流動(dòng)相的性質(zhì)影響。液相色譜儀實(shí)踐中主要靠調(diào)整流動(dòng)相的組成配比及PH值，以獲得組分間的分配系數(shù)差異及適宜的保留時(shí)間，達(dá)到分離的目的。

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