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SPE固相萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中的氯霉素

前言

氯霉素曾廣泛用于治療各種敏感菌感染，后因?qū)υ煅到y(tǒng)有嚴(yán)重不良反應(yīng)，故對(duì)其臨床應(yīng)用現(xiàn)已做出嚴(yán)格控制。氯霉素可用于傷寒、副傷寒和立克次體病等及敏感菌所致的嚴(yán)重感染。氯霉素在腦脊液中濃度較高，也常用于治療其他藥物療效較差的腦膜炎患者。由于氯霉素可引起嚴(yán)重的毒副作用，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測(cè)方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)牛肉中的氯霉素進(jìn)行固相萃取富集，用高效液相色譜質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

本文參考“農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-2-2006 動(dòng)物源食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法”采用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，測(cè)定氯霉素的回收效果，實(shí)驗(yàn)證明，氯霉素回收率在90.2%~99.5%之間，重現(xiàn)性RSD為3.5%，回收率和重現(xiàn)性良好，說(shuō)明SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)可靠、穩(wěn)定，適用于動(dòng)物源食品中的氯霉素樣品前處理。

關(guān)鍵詞：氯霉素，SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜， 

1實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1儀器與試劑

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

SCIEX 4500 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（SCIEX）；

氯霉素，100 mg/L，壇墨質(zhì)檢；

氯霉素D5，100 mg/L，壇墨質(zhì)檢；

氯化鈉（分析純）；

正己烷（色譜純）；

乙酸乙酯（色譜純）；

乙腈（色譜純）；

C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL萊伯泰科）；

實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

取1 mL氯霉素標(biāo)品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

取100 μL 的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

取1 mL氯霉素D5標(biāo)品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

取100 μL 的氯霉素D5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1樣品準(zhǔn)備

取均質(zhì)后的樣品5g置于50mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)200μL，氯霉素標(biāo)液200μL,加入乙腈5mL，4%氯化鈉5mL，渦旋2min，4000rad/min離心10min，取上清液至另一個(gè)50mL離心管中，重復(fù)提取一次，合并提取液。提取液中加入正己烷5mL，渦旋2min，2000rad/min離心10min，棄去上層清液，重復(fù)一次，加入水飽和乙酸乙酯5mL，渦旋1min，2000rad/min離心10min，將上層液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，重復(fù)提取一次，合并提取液氮吹至干，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，備用。

同時(shí)做樣品空白，加入內(nèi)標(biāo)200μL，剩下同樣品處理 。

1.3.2 固相萃取及濃縮

按照?qǐng)D1所示的方法進(jìn)行SPE1000方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進(jìn)行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至干，用1 mL流動(dòng)相定容。

圖1   氯霉素的SPE富集方法

1.3.3 UPLC-MS測(cè)定牛肉中氯霉素

液相條件：

色譜柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm； 

流    速：0.2 mL/min ；

進(jìn)樣量：5 μL；

流動(dòng)相：乙腈：水=40:60;

MS條件：

氣簾氣~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  噴霧電壓-4500V

表1  氯霉素母離子/子離子(定量例子152.0)

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1牛肉中氯霉素色譜圖

2.1.1牛肉中氯霉素標(biāo)品色譜圖

圖2為取200 μL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液和200μL氯霉素內(nèi)標(biāo)工作液，用流動(dòng)相定容到1.0 mL檢測(cè)，氯霉素標(biāo)品出峰色譜圖，出峰時(shí)間為 1.50min。

圖2  氯霉素標(biāo)品出峰色譜圖

2.1.2牛肉中氯霉素樣品色譜圖

圖3氯霉素加標(biāo)樣品出峰色譜圖，出峰時(shí)間為1.50min，圖4為空白樣品色譜圖。

圖3  氯霉素加標(biāo)樣品出峰色譜圖

圖4   空白樣品色譜圖

2.2 UPLC-MS測(cè)定牛肉中氯霉素回收率

液質(zhì)測(cè)定牛肉中氯霉素回收率計(jì)算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率在之間90.2%~99.5%，重現(xiàn)性RSD為3.5%。

表2  牛肉中氯霉素的加標(biāo)回收率（加標(biāo)量4 ug/kg）

3結(jié)果與討論

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)凈化的樣品，其回收率在90.2%~99.5%,重現(xiàn)性為3.5%，準(zhǔn)確度與平行性良好且自動(dòng)化效率高，可應(yīng)用于此類樣品的前處理方法中。

參考文獻(xiàn)

農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-2-2006 動(dòng)物源食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法