實驗步驟    
基本方案

材 料

包被抗體：純化的抗 IL-10 M A b (JES-5-2A 5 鼠 IgGl 抗鼠

IL-10; Phamiingen)

PBS
已知濃度的純化的小鼠 IL-10 標(biāo)準(zhǔn)品

R P M M O *培養(yǎng)基

待測樣品

封閉液： 1 0 % (W V ) F C S ， P B S 配制，無菌過濾， 4°C 保存

洗滌緩沖液： 0.05% O V V ) Tween 20, P B S 配制，室溫保存 1?2 周

生物素化的二抗（S X C l 抗 鼠 IL-10; Pharmingen)

二抗緩沖液

辣 根 過 氧 化 物 酶（H R P ) 偶 聯(lián) 的 鏈 親 和 素（JacksonImmunoresearch # 016-030-084)

底物溶液

終止液：0.2mol/L 檸檬酸鈉，室溫保存

1 2 通道移液器

檢測板： 9 6 孔圓底聚乙浠微孔滴定板（Dynatech， Falcon)

9 6 孔聚苯乙烯微量板

ELISA 板 洗 滌 儀（如 Elcatech 的 Elcawash)

多孔掃描分光光度計（可測雙波長；如 V M A X 、 Molecular Devices)

曲 線 分 析 軟 件（如 Molecular Devices 的 Softmax 或 Biometallics 的 DeltaSoft)

1 . 準(zhǔn) 備 1?10/ug/m l 包被抗體， P B S 配制。用 1 2 通道移液器立即在檢測板的每孔中加入 50ul 包被抗體， 37°C 孵 育 30 min。

2.在 9 6 孔聚苯乙烯板中，按如下方法系列稀釋 IL-I O 標(biāo)準(zhǔn)品。加 100M1 R P M I -I O *培養(yǎng)基到 B ?G 行 的 第 2 、 3 列 。在 孔 G 2 、 G 3 中 加 入 100M110ng/m l I L -1 0 標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，從中吸取 l 〇〇 Ml 加 到 孔 F 2 、 F 3 中。重復(fù)一系列的倍比稀釋直到 C 行 ，zui后稀釋到孔 C 2 、 C 3 中 取 100^1 丟棄。 B 2 、 B 3 (只加培養(yǎng)基）作為陰性對照。