生物試劑銷(xiāo)售中心LX2細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

生物試劑銷(xiāo)售中心細(xì)胞庫(kù)提供遺傳變異細(xì)胞系、正常組織來(lái)源細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、工程細(xì)胞系、干細(xì)胞系，涉及人類(lèi)，大鼠、小鼠、鳥(niǎo)類(lèi)、倉(cāng)鼠、魚(yú)類(lèi)、貓類(lèi)、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長(zhǎng)鼻袋鼠等。生物試劑銷(xiāo)售中心LX2細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

第二節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的一般過(guò)程

一、準(zhǔn)備工作 準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

二、取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。

理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。生物試劑銷(xiāo)售中心LX2細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。

原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱(chēng)為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性。

四、凍存及復(fù)蘇（可參閱后面有關(guān)章節(jié)）為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

凍存過(guò)程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。

五、常用儀器設(shè)備 無(wú)菌室,超凈工作臺(tái),三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機(jī),無(wú)菌過(guò)濾器,洗刷裝置,細(xì)胞計(jì)數(shù)板和電子細(xì)胞技術(shù)儀等等。

HOC1細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

OVAC細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

OVCAR-3細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

OVCAR-5細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

SK-OV-3細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

SW626細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

TOV-21G細(xì)胞，人卵巢癌細(xì)胞

CoC1/DDP細(xì)胞，人卵巢癌CoC1順鉑耐藥亞株細(xì)胞

A2780/DDP細(xì)胞，人卵巢癌耐DDP細(xì)胞

PA-1細(xì)胞，人卵巢畸胎瘤細(xì)胞

ES-2細(xì)胞，人卵巢透明癌細(xì)胞

K562細(xì)胞，人慢性髓原白血病細(xì)胞

K562-A細(xì)胞，人慢性髓原白血病細(xì)胞

HCE-8962細(xì)胞，人盲腸未分化癌細(xì)胞

HCT-8細(xì)胞，人盲腸腺癌細(xì)胞

Hce-8693細(xì)胞，人盲腸腺癌（未分化）細(xì)胞

HNE1/DDP細(xì)胞，人耐DDP鼻咽癌細(xì)胞

MCF-7/ADR細(xì)胞，人耐阿霉素乳腺癌細(xì)胞

HCT-8/VCR細(xì)胞，人耐長(zhǎng)春新堿結(jié)腸癌細(xì)胞

SGC-7901/VCR細(xì)胞，人耐長(zhǎng)春新堿胃腺癌細(xì)胞

A172細(xì)胞，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

HS 683細(xì)胞，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

SHG-44細(xì)胞，人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

TG-905 細(xì)胞，人腦膠質(zhì)母瘤細(xì)胞

SF126細(xì)胞，人腦瘤細(xì)胞

SF17細(xì)胞，人腦瘤細(xì)胞

SF763細(xì)胞，人腦瘤細(xì)胞

SF767細(xì)胞，人腦瘤

H4細(xì)胞，人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

U-373MG細(xì)胞，人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

D283 Med細(xì)胞，人腦髓母瘤細(xì)胞

SK-N-SH細(xì)胞，人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞

U-251細(xì)胞，人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞

U-118 MG細(xì)胞，人腦星形膠質(zhì)母瘤細(xì)胞

U-87 MG細(xì)胞，人腦星形膠質(zhì)母瘤細(xì)胞

5637細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞

 CRL-1472細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞

BIU-87細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞

EJ 細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞

EVC304細(xì)胞，人膀胱癌細(xì)胞

SCaBER細(xì)胞，人膀胱鱗癌細(xì)胞

 BIU-87細(xì)胞，人膀胱移行癌細(xì)胞

J82細(xì)胞，人膀胱移行癌細(xì)胞

SW 780細(xì)胞，人膀胱移行癌細(xì)胞

T24細(xì)胞，人膀胱移行癌細(xì)胞

UM-UC-3細(xì)胞，人膀胱移行癌細(xì)胞

RT4細(xì)胞，人膀胱移行乳瘤細(xì)胞

Tera-2細(xì)胞，人胚惡性畸胎瘤細(xì)胞

293AV細(xì)胞，人胚腎-用于病毒包裝細(xì)胞

HTB-67細(xì)胞，人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

SK-MEL-1細(xì)胞，人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

22RV1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

9L-B細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

9L-E細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

ALVA細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

C4-2細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

CL1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

DU 145細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

DU145*細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

gpc-1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

JCA-1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

LNcap細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

Lncap clone FGC細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

ME12細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

P69細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

PC-13細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

PC-3細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞

第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌環(huán)境

一、無(wú)菌室

無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無(wú)菌室的消毒和防污染：為保持無(wú)菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時(shí)），每周甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒。實(shí)際工作中，要根據(jù)無(wú)菌室建筑材料的差異來(lái)選擇合適的消毒方法。

此外，還應(yīng)注意防止無(wú)菌室的污染。造成無(wú)菌室污染的可能包括：送入無(wú)菌室的風(fēng)沒(méi)有被過(guò)濾除菌；進(jìn)出無(wú)菌室時(shí)，能使外界空氣直接對(duì)流進(jìn)無(wú)菌室的操作間；等。

二、超凈工作臺(tái)

工作原理：鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣通過(guò)過(guò)濾器得以?xún)艋?，凈化的空氣被徐徐吹過(guò)臺(tái)面空間而將其中的塵埃、細(xì)菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構(gòu)成無(wú)菌環(huán)境。根據(jù)氣流在超凈工作臺(tái)的流動(dòng)方向不同，可將超凈工作臺(tái)分為側(cè)流式、直流式和外流式三種類(lèi)型。

超凈臺(tái)的使用與保養(yǎng)：超凈臺(tái)的平均風(fēng)速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過(guò)大、過(guò)小均不利于保持凈化度；使用前開(kāi)啟超凈臺(tái)內(nèi)紫外燈照射10－30分鐘，然后讓超凈臺(tái)預(yù)工作10－15分鐘，以除去臭氧和使用工作臺(tái)面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用70%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈，以保證超凈臺(tái)無(wú)菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺(tái)。