購(gòu)買試劑銷售生物試劑銷售中心RS4 11 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)注意事項(xiàng)如下：

1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。

2 對(duì)于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

3 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和本公司技術(shù)部溝通交流。

我們?nèi)娜鉃槟?wù)，提供產(chǎn)品，保障售后服務(wù)，真心把客戶奉為上帝，及時(shí)處理客戶訂單，全程跟蹤貨源，采用誠(chéng)信快遞運(yùn)輸，認(rèn)真解答客戶疑問(wèn)，對(duì)客戶售后問(wèn)題，不拖沓，不推卸責(zé)任，認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度。生物試劑銷售中心RS4 11 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

第二節(jié) 細(xì)胞分離技術(shù)

一、從原代組織中分離細(xì)胞 將組織塊分離（散）成細(xì)胞懸液的方法有多種，zui常用的是機(jī)械解離細(xì)胞法、酶學(xué)解離細(xì)胞法以及螯合劑解離細(xì)胞法。

從原代組織中獲得單細(xì)胞懸液的一般方法是酶解聚。細(xì)胞暴露在酶中的時(shí)間要盡可能的短，以保持zui大的活性。下列步驟可以解聚整個(gè)組織，獲得較高產(chǎn)量的有活性細(xì)胞。

1、胰蛋白酶 (Trypsin)

在去除不需要的組織后，使用無(wú)菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4mm小片，通過(guò)懸浮在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復(fù)清洗2到3次。

將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25％溶解在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100mg組織加入1ml 胰蛋白酶）。

在4℃孵育6到18小時(shí)，使幾乎沒(méi)有胰蛋白酶活性的酶盡可能滲透進(jìn)去。

移棄組織碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含殘留胰蛋白酶的組織碎片20到30分鐘。

在組織碎片加入熱的*培養(yǎng)基，用移液管輕輕地分散組織。如果使用無(wú)血清培養(yǎng)基，要加入大豆胰蛋白酶抑制劑。

通過(guò)無(wú)菌不銹鋼絲網(wǎng)（100～200mm）過(guò)濾，分散所有剩余組織。計(jì)數(shù)和接種細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。生物試劑銷售中心RS4 11 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

2、膠原酶 (Collagenase)

用無(wú)菌解剖刀和剪子把剩余組織切成3~4mm小片，用Hanks'平衡液（HBSS）清洗組織碎片幾次。

加入膠原酶（50～200單位/ml，溶解在HBSS中）。

在37℃孵育4到18小時(shí)。加入3mM CaCl₂增加解離效率。

通過(guò)無(wú)菌不銹鋼絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞懸液，以分離分散細(xì)胞、組織碎片和較大的碎片。如果需要進(jìn)一步的解聚，在碎片中加入新鮮的膠原酶。

通過(guò)離心在HBSS中清洗懸液幾次。

再一次在培養(yǎng)基中懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)和接種細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。

3、Dispase

用無(wú)菌解剖刀和剪子把剩余組織切成3~4mm小片，用不含鈣鎂的平衡鹽溶液清洗組織碎片幾次。加入Dispase（0.6～2.4單位/ml 溶解在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液）在37℃孵育20分鐘到幾個(gè)小時(shí)。

通過(guò)無(wú)菌不銹鋼絲網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞懸液，以分離分散細(xì)胞、組織碎片和較大的碎片。如果需要進(jìn)一步的解聚，在碎片中加入新鮮的Dispase。通過(guò)離心在平衡鹽溶液中清洗懸液幾次。再一次在培養(yǎng)基中懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)和接種細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。

TE-10細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

TE-11細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

TE-13 細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

NEC細(xì)胞，人食管癌細(xì)胞

RB細(xì)胞，人視網(wǎng)膜母瘤細(xì)胞

 HTB-169細(xì)胞，人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

WERI-Rb-1細(xì)胞，人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

THP-1細(xì)胞，人髓系白血病單核細(xì)胞

JeKo-1細(xì)胞，人套淋巴瘤細(xì)胞

KU812細(xì)胞，人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞

AGS細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

AZ-521細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

BGC-823細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

BGC-823-EGFP-puro細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

GC-7901細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

Hs-746T細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

KATO III細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

MGC803細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

MKN-45細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

NCI-N87細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

NUGC-3細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

SGC-7901*細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

SNU-1細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

SNU-5細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

SNU-638細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞

HGC-27細(xì)胞，人胃癌（未分化）細(xì)胞

MKN-28細(xì)胞，人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

GIST-T1細(xì)胞，人胃腸間質(zhì)瘤細(xì)胞

SGC7901細(xì)胞，人胃腺癌細(xì)胞

HT-1080細(xì)胞，人纖維肉瘤細(xì)胞

Acc-2細(xì)胞，人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

二、從原培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞:以下是從基層迅速分離細(xì)胞，且保持細(xì)胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對(duì)于所有細(xì)胞系的廣泛應(yīng)用，每一種系統(tǒng)*條件和施用濃度應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加以確定。再次培養(yǎng)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞的活性。細(xì)胞的活率應(yīng)該超過(guò)90％對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，降低胰蛋白酶使用量。

1、移棄使用過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)基。

2、使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid，乙二胺四乙酸.)清洗細(xì)胞（看表確定正確的清洗溶液）。在培養(yǎng)瓶對(duì)著細(xì)胞的一面加入清洗溶液，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶1到2分鐘清洗細(xì)胞層，然后去除清洗液。

3、以2～3ml/25cm²的量，加選擇的分離液(見(jiàn)表)到培養(yǎng)瓶對(duì)著細(xì)胞的一面。確保分離液覆蓋細(xì)胞層。在37℃孵育培養(yǎng)瓶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶。通常，在5到15分鐘內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)脫落。細(xì)胞分離需要的時(shí)間因細(xì)胞系不同而有所變化。仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分離過(guò)程，避免細(xì)胞受損傷。對(duì)難于從培養(yǎng)瓶基層分離的細(xì)胞系，可以輕輕敲打，以加速分離過(guò)程。

4、當(dāng)細(xì)胞*分離時(shí)，垂直放置培養(yǎng)瓶，讓細(xì)胞流到培養(yǎng)瓶的底部。在培養(yǎng)瓶中加入*培養(yǎng)基，通過(guò)移液管在單層細(xì)胞表面反復(fù)吹打來(lái)分散細(xì)胞。計(jì)數(shù)并再次培養(yǎng)細(xì)胞。

5、對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，加入大豆胰蛋白酶抑制劑。通常使用1∶1（v∶v）0.25mg/ml胰蛋白酶抑制劑到胰蛋白酶中將抑制胰蛋白酶活性