生物試劑銷售中心CEMO-1細胞培養(yǎng)技術

生物試劑銷售中心細胞庫提供遺傳變異細胞系、正常組織來源細胞系、腫瘤細胞系、工程細胞系、干細胞系，涉及人類，大鼠、小鼠、鳥類、倉鼠、魚類、貓類、狗、牛、貂、豬、恒河猴、長鼻袋鼠等。生物試劑銷售中心CEMO-1細胞培養(yǎng)技術

第二節(jié) 細胞培養(yǎng)的一般過程

一、準備工作 準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

二、取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經(jīng)過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養(yǎng) 將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng)，一般應在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。生物試劑銷售中心CEMO-1細胞培養(yǎng)技術

正在培養(yǎng)中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。

原代培養(yǎng)一般有一段潛伏期（數(shù)小時到數(shù)十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。

四、凍存及復蘇（可參閱后面有關章節(jié)）為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)器具，CO2培養(yǎng)箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數(shù)板和電子細胞技術儀等等。

HOC1細胞，人卵巢癌細胞

OVAC細胞，人卵巢癌細胞

OVCAR-3細胞，人卵巢癌細胞

OVCAR-5細胞，人卵巢癌細胞

SK-OV-3細胞，人卵巢癌細胞

SW626細胞，人卵巢癌細胞

TOV-21G細胞，人卵巢癌細胞

CoC1/DDP細胞，人卵巢癌CoC1順鉑耐藥亞株細胞

A2780/DDP細胞，人卵巢癌耐DDP細胞

PA-1細胞，人卵巢畸胎瘤細胞

ES-2細胞，人卵巢透明癌細胞

K562細胞，人慢性髓原白血病細胞

K562-A細胞，人慢性髓原白血病細胞

HCE-8962細胞，人盲腸未分化癌細胞

HCT-8細胞，人盲腸腺癌細胞

Hce-8693細胞，人盲腸腺癌（未分化）細胞

HNE1/DDP細胞，人耐DDP鼻咽癌細胞

MCF-7/ADR細胞，人耐阿霉素乳腺癌細胞

HCT-8/VCR細胞，人耐長春新堿結腸癌細胞

SGC-7901/VCR細胞，人耐長春新堿胃腺癌細胞

A172細胞，人腦膠質瘤細胞

HS 683細胞，人腦膠質瘤細胞

SHG-44細胞，人腦膠質瘤細胞

TG-905 細胞，人腦膠質母瘤細胞

SF126細胞，人腦瘤細胞

SF17細胞，人腦瘤細胞

SF763細胞，人腦瘤細胞

SF767細胞，人腦瘤

H4細胞，人腦神經(jīng)膠質瘤細胞

U-373MG細胞，人腦神經(jīng)膠質瘤細胞

D283 Med細胞，人腦髓母瘤細胞

SK-N-SH細胞，人腦星形膠質瘤細胞

U-251細胞，人腦星形膠質瘤細胞

U-118 MG細胞，人腦星形膠質母瘤細胞

U-87 MG細胞，人腦星形膠質母瘤細胞

5637細胞，人膀胱癌細胞

 CRL-1472細胞，人膀胱癌細胞

BIU-87細胞，人膀胱癌細胞

EJ 細胞，人膀胱癌細胞

EVC304細胞，人膀胱癌細胞

SCaBER細胞，人膀胱鱗癌細胞

 BIU-87細胞，人膀胱移行癌細胞

J82細胞，人膀胱移行癌細胞

SW 780細胞，人膀胱移行癌細胞

T24細胞，人膀胱移行癌細胞

UM-UC-3細胞，人膀胱移行癌細胞

RT4細胞，人膀胱移行乳瘤細胞

Tera-2細胞，人胚惡性畸胎瘤細胞

293AV細胞，人胚腎-用于病毒包裝細胞

HTB-67細胞，人皮膚黑色素瘤細胞

SK-MEL-1細胞，人皮膚黑色素瘤細胞

22RV1細胞，人前列腺癌細胞

9L-B細胞，人前列腺癌細胞

9L-E細胞，人前列腺癌細胞

ALVA細胞，人前列腺癌細胞

C4-2細胞，人前列腺癌細胞

CL1細胞，人前列腺癌細胞

DU 145細胞，人前列腺癌細胞

DU145*細胞，人前列腺癌細胞

gpc-1細胞，人前列腺癌細胞

JCA-1細胞，人前列腺癌細胞

LNcap細胞，人前列腺癌細胞

Lncap clone FGC細胞，人前列腺癌細胞

ME12細胞，人前列腺癌細胞

P69細胞，人前列腺癌細胞

PC-13細胞，人前列腺癌細胞

PC-3細胞，人前列腺癌細胞

第三節(jié) 細胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境

一、無菌室

無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。

無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態(tài)，經(jīng)常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。實際工作中，要根據(jù)無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。

此外，還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時，能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等。

二、超凈工作臺

工作原理：鼓風機驅動空氣通過過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區(qū)構成無菌環(huán)境。根據(jù)氣流在超凈工作臺的流動方向不同，可將超凈工作臺分為側流式、直流式和外流式三種類型。

超凈臺的使用與保養(yǎng)：超凈臺的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過大、過小均不利于保持凈化度；使用前開啟超凈臺內(nèi)紫外燈照射10－30分鐘，然后讓超凈臺預工作10－15分鐘，以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態(tài)；使用完畢后，要用70%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈，以保證超凈臺無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺。