厭氧菌的甘油保藏方法:
1、 厭氧甘油的制備: 厭氧瓶或厭氧管中放置一定量的甘油,甘油的量根據(jù)需要加入,不要多加,因?yàn)閰捬醺视椭苽浜靡院蟛荒芊磸?fù)滅菌,反復(fù)滅菌甘油會(huì)變性而呈黃色,且有一股芳香味道。加入終濃度為0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厭氧瓶中通N2,通氣時(shí)間和配制培養(yǎng)基時(shí)時(shí)間相同。蓋上塞子和蓋子。121 ℃, 20 min 滅菌后備用。
2、 取新鮮菌液(對(duì)數(shù)期),在通N2 的情況下,用針筒和針頭往有菌液的厭氧管中加入終濃度為15-20 %的厭氧甘油,再通一會(huì)N2,目的是趕走在轉(zhuǎn)移甘油過(guò)程中帶進(jìn)去的O2。蓋上塞子和蓋子,混勻,凍于-80 ℃。
3、 活化:用針頭和針頭吸取一定甘油保藏的菌液,加到培養(yǎng)基當(dāng)中,加的量一般要多于1 %,因?yàn)閰捬蹙纳锪勘容^小,一般2到5 %左右。目測(cè)加完甘油菌液的培養(yǎng)基是否渾濁,并作記錄。如果加入的菌液太多,造成一開始培養(yǎng)基就比較渾濁,會(huì)干擾我們對(duì)菌是否生長(zhǎng)的判斷,而且甘油太多也會(huì)抑制菌的生長(zhǎng)。
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