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ELISA試劑盒各環(huán)節(jié)中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

來(lái)源:研域生物技術(shù)(上海)有限公司   2017年01月04日 09:04  

ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的運(yùn)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的查看效果影響較大,如不留心,有或許致使顯色不全、花板等結(jié)果。
將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的要素及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來(lái)一些啟示,前進(jìn)試驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa試驗(yàn)操作中或許影響結(jié)果的要素,并給出相應(yīng)的解決辦法一、選擇試劑
選擇質(zhì)量的查看試劑,嚴(yán)峻按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
或許要素:
1)血清或血漿標(biāo)本分別欠好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中,加樣板過(guò)多構(gòu)成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒標(biāo)本為血清:將血液先天然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)查看,可放在2-8℃冰箱中,若要儲(chǔ)存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4) 假如選用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
三、 孵育
或許要素:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時(shí)間人為延伸,致使非特異性緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 2) 按說(shuō)明過(guò)程嚴(yán)峻操控操作時(shí)間。
四、洗板
或許要素:
1) 選用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量缺乏,致使洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,致使洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過(guò)多構(gòu)成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
解決辦法:
1)ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(選擇潔凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

 

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