細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書

主要用途

細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達，催化生成深藍色的沉積產(chǎn)物，從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞作為細胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細胞生物學研究。其適用于各種人體和動物細胞或活體內(nèi)（in vivo）檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感，堪稱上同類產(chǎn)品佳。

技術(shù)背景

細胞復(fù)制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現(xiàn)出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細胞衰老的生物學標記。

產(chǎn)品內(nèi)容

保存方式

保存 染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里； 稀釋液（Reagent D）和 染色液（Reagent E）用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月

用戶自備

2毫升離心管：用于配制染色工作液

15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液

恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育

光學顯微鏡：用于觀察染色后的細胞

實驗步驟

操作一、25cm²細胞培養(yǎng)瓶染色

實驗開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液（Reagent D）到2毫升離心管，加入xx微升 染色液（Reagent E），混勻后，放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標記為 染色工作液。然后進行下列操作：

• 小心抽去25cm²細胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
• 小心加入xx毫升 清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面
• 小心抽去清理液
• 小心加入xx毫升 固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去固定液
• 小心加入xx毫升 酸性液（Reagent C），清洗細胞表面
• 小心抽去酸性液
• 重復(fù)實驗步驟7和8一次
• 小心加入xx毫升 染色工作液，覆蓋整個細胞表面
• 放進37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現(xiàn)藍色（注意：避免液體蒸發(fā)）
• 在光學顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現(xiàn)藍色。

操作二、24孔細胞培養(yǎng)板染色

實驗開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升 稀釋液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，加入xx微升 染色液（Reagent E），混勻后，放進37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標記為 染色工作液。然后進行下列操作。

1．小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入xx微升 清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液

4．每孔加入xx微升 固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育5分鐘

6．小心抽去固定液

7．每孔加入xx微升 酸性液（Reagent C），清洗細胞表面

8．小心抽去酸性液

9．重復(fù)實驗步驟7和8一次

10．每孔加入xx微升 染色工作液，覆蓋整個細胞表面

11．放進37℃培養(yǎng)箱，孵育3小時至16小時，或細胞呈現(xiàn)藍色（注意：避免液體蒸發(fā)）

12．在光學顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細胞為陽性細胞，呈現(xiàn)藍色

注意事項

• 本產(chǎn)品為100次（4個24孔板）或20次（20個25cm²細胞培養(yǎng)瓶）操作
• 操作時，須戴手套
• 本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達到優(yōu)化
• 使用時，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗效果
•  染色工作液避免光照
• 細胞β-半乳糖苷酶活性強，孵育3小時即顯示陽性；細胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時
• 細胞染色長孵育時間為24小時
• 孵育時避免液體蒸發(fā)
• 本產(chǎn)品染色敏感，甚至對于微弱表達的酶活性仍然顯色清晰；用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處
• 細胞呈現(xiàn)藍色的部位為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方
• 染色后的細胞樣品可以在4℃冰箱里長期保存，同樣須避免光照
• 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整處理液：

• 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色敏感