1、制備底層培養(yǎng)基：取直徑為90mm平皿，注入約15mL-20mL加熱融化的培養(yǎng)基（其中塑料平皿加入15mL，玻璃平皿加入20mL），使其在平皿底部均勻攤布，放置在水平臺面上使其凝固，作為底層；

2、制備菌層 ：另取適量培養(yǎng)基加熱融化后，放冷至48-50℃（芽孢可至60℃），加入適量的菌懸液（能得到清晰的抑菌圈為度），搖勻，用移液器（槍頭滅菌）吸取5 mL上述培養(yǎng)基快速注入平皿*，按同一方向輕輕搖動平皿使其在底層上均勻攤布，作為菌層（注意事項：菌層培養(yǎng)基表面一定要平整，否則會導致漏液）放置在水平臺上冷卻；

3、放置HB四連式牛津杯 ：用無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正面的凸點（*有凸點且平衡翼上標有“海博生物”字體的為產(chǎn)品正面），將其放置在菌層培養(yǎng)基表面上，將壓杯板蓋上，壓住牛津杯5秒左右，使4個小杯與培養(yǎng)基表面緊密接觸，防止出現(xiàn)縫隙導致漏液，然后小心拿走壓杯板（壓杯板已經(jīng)輻照滅菌，可以直接使用；多次使用，可用酒精棉擦拭即可）；

4、加入抗生素，進行培養(yǎng) ：向小杯中加入抗生素，將平皿平穩(wěn)轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱培養(yǎng)（轉(zhuǎn)移過程中輕拿輕放，避免劇烈震動）……