很實用的Western Blot實驗流程

來源：北京科瑞美科技有限公司 2017年02月04日 15:47

什么是WB?

Western Blot中文名稱“蛋白免疫印跡”，是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術。

一.實驗流程：

樣本制備 ---SDS-PAGE電泳---轉(zhuǎn)膜---封閉---抗體孵育---顯色

二.標本類型：

1.細胞培養(yǎng)上清（胞外）

2.細胞和組織裂解物

三.組織樣本處理方法：

1．采集標本后，稱取組織凈重，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫?/span>

2．標本融化后置冰上，加5倍體積冷PBS（可參考文獻加適量蛋白酶抑制劑），低溫勻漿研磨處理；

3．4℃ 6000rpm離心15min，收集上清（注意去掉上層油脂），分裝后一份待檢測，其余冷凍備用；

4. 蛋白定量。

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