重組質(zhì)體的限制酶分析

來源：上海源葉生物科技有限公司 2010年11月25日 09:33

儀器用具：

微量離心機

冰浴

Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器

UV transilluminator 及影像分析系統(tǒng)

防護面罩

藥品試劑：

限制酶：BamHI, HindIII （20 U/μL, BioLabs）

10×NE Buffer BamHI （0.1 M Tris-HCl, pH 7.9; 0.1 M MgCl2; 1.5 M NaCl; 10mM dithiothreitol）

100×BSA （10 mg/mL bovine serum albumin）使用前稀釋十倍成10×無菌水

方法步驟：

1）正反應(yīng)株，接種于3 mL LB/Amp 培養(yǎng)基，于37℃震蕩培養(yǎng)過夜后，以2.1 的方法抽取質(zhì)體。

2）每一株每反應(yīng)各取3 μL 質(zhì)體，另取pQE31 及pBlueGus 每反應(yīng)各3 μL，分別依下表進行HindIII 及BamHI 切割。

3）以1% agarose gel 進行電泳分析，由電泳圖譜挑選帶有gus DNA 片段的重組質(zhì)體。

?? 照相后的電泳膠片不要丟掉，可繼續(xù)進行Southern 轉(zhuǎn)印。

限制酶分析請依照下列表格加入：

# 各管置請于37℃反應(yīng)至少1 h。

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