● 凋亡簡(jiǎn)介

細(xì)胞死亡有兩種不同的方式：凋亡和壞死。在正常組織中，不需要的細(xì)胞可以發(fā)生主動(dòng)而自發(fā)的死亡，這種細(xì)胞的程序性死亡也被稱(chēng)為細(xì)胞凋亡。與壞死不同，細(xì)胞凋亡不伴炎癥反應(yīng)，細(xì)胞被快速清除而不影響組織的整體功能，是真核細(xì)胞死亡zui常見(jiàn)的形式。兩者可根據(jù)死亡細(xì)胞的形態(tài)、生物化學(xué)改變等的不同而加以鑒別。細(xì)胞凋亡在調(diào)控細(xì)胞數(shù)量上發(fā)揮與增值相反的作用，和分化、增值協(xié)調(diào)作用，保持機(jī)體正常生存和動(dòng)態(tài)平衡*的兩個(gè)方面。正常的細(xì)胞凋亡在許多生理過(guò)程中包括免疫系統(tǒng)成熟和效應(yīng)機(jī)制、組織、器官和四肢胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育以及激素依賴的組織重塑等都是必需的。

● 凋亡異常的相關(guān)的疾病

許多因素都可以誘發(fā)細(xì)胞發(fā)生凋亡，如：某些細(xì)胞被剝奪其生存依賴的細(xì)胞因子（如IL-3、促紅細(xì)胞生成素）或TNF、Fas等死亡受體被激活后都可誘發(fā)凋亡；正常細(xì)胞在遭遇非生理性刺激（如抗腫瘤藥物、離子輻射）時(shí)也發(fā)生凋亡。凋亡紊亂（生理性的細(xì)胞凋亡受到抑制或/和病理性的細(xì)胞凋亡過(guò)度）在許多疾病諸如缺血、中風(fēng)、心臟疾病、腫瘤、AIDS、自身免疫病、中毒性肝病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變等，都起著重要的作用。如：AIDS表現(xiàn)為被HIV感染的CD4⁺T細(xì)胞大量凋亡，從而造成獲得性免疫缺陷；另外，某些神經(jīng)退行性疾病也是由于特定的神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生凋亡而致；與之相反，凋亡被抑制也對(duì)身體造成嚴(yán)重的危害。如果自身反應(yīng)性的B細(xì)胞和T細(xì)胞不能通過(guò)凋亡被清除，就會(huì)誘導(dǎo)自身免疫性疾病。癌癥也可以看作是細(xì)胞凋亡異常減少的疾病，腫瘤的凈增長(zhǎng)就是不斷增加的生長(zhǎng)速率與不斷減少的凋亡速率共同作用的結(jié)果。各種抗癌藥物、放射都可以觸發(fā)腫瘤凋亡；腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性受幾種癌基因的調(diào)控；凋亡可能是癌癥治療的一種預(yù)后標(biāo)志，腫瘤學(xué)上所觀察到的這些凋亡現(xiàn)象已引起人們廣泛而持久的興趣。

● Annexin V-FITC＆PI凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理

正常細(xì)胞在凋亡過(guò)程中，其細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、核酸以及凋亡相關(guān)蛋白都發(fā)生顯著變化，和正?；驂乃兰?xì)胞相比具有鮮明特征，因此，根據(jù)它們?cè)谠谛螒B(tài)學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以用多種檢測(cè)方法將三者區(qū)別開(kāi)來(lái)。其中，Annexin V-FITC＆PI雙染法可借助流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量檢測(cè)，也可以原位染色的定性檢測(cè)。因?yàn)樵摲椒ê?jiǎn)單、便捷、可同時(shí)區(qū)分早期和晚期凋亡，因此是目前檢測(cè)細(xì)胞凋亡和凋亡率的zui常用和廣泛的方法之一。

原理：正常細(xì)胞的磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而細(xì)胞凋亡早期開(kāi)始，細(xì)胞膜的不對(duì)稱(chēng)性發(fā)生顯著改變，即細(xì)胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。這種變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片段化。 

Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂存在的環(huán)境結(jié)合蛋白，與PS有高度親和力，故Annexin V在有Ca²⁺存在的環(huán)境中可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合。因此Annexin V被稱(chēng)為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙錠（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜。凋亡晚期的細(xì)胞和死亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜的完整性破壞，通透性增加，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核中核酸染紅。因此將Annexin V-FITC與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。在熒光顯微鏡下，可觀察到細(xì)胞的染色情況。在流式細(xì)胞儀上，可對(duì)正常、早晚期凋亡細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

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