Western Blot實(shí)驗(yàn)問答集錦之蛋白marker篇

來源：愛必信（上海）生物科技有限公司 2017年03月01日 11:01

Western Blot （WB）即蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)。是將蛋白樣本通過聚丙烯酰胺電泳按分子量大小分離，再轉(zhuǎn)移到雜交膜（blot）上，然后通過一抗/二抗復(fù)合物對靶蛋白進(jìn)行特異性檢測的方法。WB是進(jìn)行蛋白質(zhì)分析zui流行和成熟的技術(shù)之一。本篇討論Western Blot實(shí)驗(yàn)中關(guān)于蛋白marker的常見問題分析，有助于成功完成WB。

1.蛋白marker為什么跑的條帶不清楚？

答：首先確認(rèn)膠的濃度、PH值，離子強(qiáng)度是不是正常，這些都會影響條帶的質(zhì)量。其次確定電泳液的PH、離子強(qiáng)度是否正確，如甘氨酸濃度太低時，蛋白會濃縮不好；電泳液新鮮配制。

2.為什么蛋白marker總是跑得比其他樣品慢？

答：你的蛋白marker跑得比其他指示劑慢，可能只是因?yàn)樗麄兊碾娪舅俣炔灰粯?，不是一個公司生產(chǎn)的，選擇愛必信一籃子采購就可以避免這樣的問題了。

3.為什么轉(zhuǎn)膜時marker不清楚？

答：在western Blot過程中，蛋白Marker就像個螺絲釘一樣雖然是個小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個小細(xì)節(jié)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。這個 Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。

4.怎么制作蛋白marker？

答：少年，你能提出這個問題是很有前途的。蛋白marker制作復(fù)雜，愛必信有現(xiàn)成的，*，實(shí)驗(yàn)效果*，拿好不謝！

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