VELP凱氏定氮儀是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理，通過測定樣品中氮的含量從而計(jì)算蛋白質(zhì)含量的儀器。因其蛋白質(zhì)含量測量計(jì)算的方法叫做凱氏定氮法，故被稱為凱氏定氮儀。

　　VELP凱氏定氮儀主要作用是用于生化試驗(yàn)中。它的工作是根據(jù)蛋白質(zhì)中氮的含量恒定的原理，通過測定樣品中氮的含量從而計(jì)算蛋白質(zhì)含量的計(jì)算。

　　VELP凱氏定氮儀的操作方法

　　一、消化

　　根據(jù)樣品量的多少選擇適宜的凱氏燒瓶4個(gè)(此處以50毫升為例)，其中2個(gè)為對(duì)照。向燒瓶內(nèi)加入準(zhǔn)確稱量的樣品，注意要把樣品加至燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個(gè)作空白對(duì)照，好對(duì)樣品進(jìn)行校正。

　　在每個(gè)燒瓶中加入約300毫克硫酸鉀-硫酸銅混合物(硫酸鉀：五水硫酸銅=3：1、6：1或10：1均可)，再用量筒加入3毫升濃硫酸。將上述4個(gè)凱氏燒瓶放在通風(fēng)良好處(在通風(fēng)櫥中進(jìn)行)加熱消化。先用小火加熱至沸騰。此時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，應(yīng)特別注意不能讓黑色物質(zhì)上升到燒瓶頸部，否則將嚴(yán)重影響分析結(jié)果。當(dāng)混合物停止冒泡，蒸汽與二氧化硫也均勻地放出時(shí)，將火焰調(diào)節(jié)到保持瓶內(nèi)液體微微沸騰。假若發(fā)現(xiàn)瓶頸上有黑色顆粒，應(yīng)小心地將燒瓶傾斜振搖，用消化液將其洗下。

　　在消化過程中要時(shí)常轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當(dāng)消化液呈清澈淡藍(lán)色時(shí)即告消化結(jié)束。時(shí)間一般在5~6小時(shí)!若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時(shí)，消化時(shí)間需要延長1~2倍。因?yàn)檫@兩種氨基酸中的氮在短時(shí)間內(nèi)不易消化*。

　　二、蒸餾

　　洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑(取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑約1毫升，搖勻后呈紫紅色即可;混合指示劑：50毫升0.1%甲烯藍(lán)乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存于棕色瓶中)檢測是否清洗干凈。干凈標(biāo)準(zhǔn)：指示劑不變色。

　　樣品和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應(yīng)室，關(guān)閉加樣口，另取1個(gè)裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉(W/W)溶液約10毫升，從加樣口緩慢加入，當(dāng)未加完時(shí)關(guān)閉，并加入約3毫升蒸餾水，再繼續(xù)緩慢加入一半后關(guān)閉，讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱(注：在清洗儀器完畢后應(yīng)拿走加熱器)，待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計(jì)時(shí)，蒸餾5分鐘，然后移動(dòng)三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米，并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續(xù)蒸餾1分鐘。空白同樣。

　　清洗儀器，同上，不*指示劑。

　　三、滴定

　　用0.0100mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸(要標(biāo)定，費(fèi)時(shí))滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。

　　VELP凱氏定氮儀的維護(hù)方法

　　1、定期清洗VELP凱氏定氮儀，對(duì)排廢裝置進(jìn)行清洗，長時(shí)間不清洗，會(huì)堵塞管路。量取25ml醋酸溶液和5ml水，采用手動(dòng)蒸餾半小時(shí)，揮發(fā)的醋酸將清除排廢裝置內(nèi)壁上殘留的堿液。

　　2、維修當(dāng)排廢裝置堵塞后，一般為廢液缸下方的電磁閥內(nèi)被炭化的顆粒堵塞。關(guān)閉儀器電源開關(guān)，打開儀器后蓋，取下電磁閥，拆開后清除內(nèi)部廢渣后并安裝。

　　3、在每次更換完標(biāo)準(zhǔn)滴定酸或接收液后，以及對(duì)儀器進(jìn)行維修后，都要對(duì)VELP凱氏定氮儀進(jìn)行回收率的測定。一般采用硫酸銨進(jìn)行回收率分析，保證回收率在99.5%-100.5%的范圍之內(nèi)，說明VELP凱氏定氮儀正常，可以進(jìn)行樣品測定。