在這部分工作中,我們采用了高 pH 反相色譜結(jié)合二氧化鈦富集以及二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽離子交換分級(jí)兩條技術(shù)路線來對(duì)實(shí)現(xiàn)對(duì) Hela 細(xì)胞的磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋。zui終我們的實(shí)驗(yàn)一共鑒定到了 8,696 個(gè)蛋白質(zhì)上的近 40,000 個(gè)磷酸化位點(diǎn)。
在二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽離子交換分級(jí)的技術(shù)路線中,SCX 分級(jí)的梯度還值得進(jìn)一步優(yōu)化,對(duì)于這種組分較少的預(yù)分級(jí)方法,階梯洗脫會(huì)是一個(gè)更好的選擇。這種大規(guī)模的磷酸化肽段富集方法對(duì)樣品的起始量要求比較高,如果樣品較少的話,建議采用二氧化鈦富集結(jié)合強(qiáng)陽離子交換的策略,一般 2 mg 起始蛋白就能得到較多的磷酸化位點(diǎn)鑒定。ThermoFisher也提供了商業(yè)化的 IMAC 試劑盒(Cat # 88300),鑒于 IMAC 和 TiO2 對(duì)磷酸化肽段富集有著較好的互補(bǔ)性,這兩者聯(lián)用會(huì)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組的深度覆蓋達(dá)到更好的效果。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。