MTT
主要用途
MTT比色法細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)活細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（MTT）成藍(lán)紫色的不溶性甲瓚顆粒，作為檢測(cè)信號(hào)來(lái)比色定量測(cè)定活體細(xì)胞繁殖的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種生長(zhǎng)中的真核生物細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，性能長(zhǎng)期穩(wěn)定，著色清晰。
技術(shù)背景
作為細(xì)胞染色劑之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），簡(jiǎn)稱噻唑鹽染料，可以自由地進(jìn)入活細(xì)胞中。細(xì)胞繁殖快，其代謝旺盛，線粒體琥珀酸脫氫酶的活性增強(qiáng)，從而還原細(xì)胞漿中的淡黃色外源性染料為不溶性、藍(lán)紫色結(jié)晶產(chǎn)物而留存在細(xì)胞內(nèi)，使用特定有機(jī)化物質(zhì)溶解結(jié)晶顆粒而呈現(xiàn)出顏色深淺，在570nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)，反映細(xì)胞活力。
產(chǎn)品內(nèi)容
毫升
毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
用戶自備
酶標(biāo)儀：用于定量檢測(cè)染色細(xì)胞
移液排槍：用于同步加入染色試劑
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前，將 ℃冰箱里的試劑盒放在室溫下融化,置于暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
一、貼壁細(xì)胞檢測(cè)
1． 從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的 孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2． 確保 孔板中每一個(gè)孔含有 微升細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 小心加入 微升到 孔板中每一個(gè)孔里
4． 放進(jìn) ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時(shí)（可見(jiàn)紫色結(jié)晶沉淀）
5． 小心抽去每孔中含有的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無(wú)任何液體殘留） 1
比色法細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書
染色液（Reagent A）
溶解液（Reagent B）
染色液(Reagent A)
染色液(Reagent A)
6． 小心加入 微升到 孔板中每一個(gè)孔里
7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育 分鐘
8． 輕輕搖動(dòng) 孔板，使其混勻
9． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測(cè)讀：波長(zhǎng) nm
10．繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)
二、 懸浮細(xì)胞檢測(cè)
1． 從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的 孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2． 確保 孔板中每一個(gè)孔含有 微升細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 小心加入 微升到 孔板中每一個(gè)孔里
4． 放進(jìn) ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時(shí)（可見(jiàn)紫色結(jié)晶沉淀）
5． 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心 分鐘，速度為 g
6． 小心抽去每孔中含有的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無(wú)任何液體殘留）
7． 小心加入 微升到 孔板中每一個(gè)孔里
8． 放進(jìn) ℃培養(yǎng)箱里，孵育 小時(shí)
9． 輕輕搖動(dòng) 孔板，使其混勻
10．即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測(cè)讀：波長(zhǎng) nm
11．繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為500次（5個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板）操作
2． 操作時(shí)須戴手套
3． 整個(gè)操作須無(wú)菌操作
4． 建議96孔板里的細(xì)胞量在1000至100000范圍為理想狀態(tài)
5． 孵育時(shí)，須避光
6． 建議使用無(wú)細(xì)胞空對(duì)照作為背景讀數(shù)，通常吸光值為0.1
7． 懸浮細(xì)胞（例如血白細(xì)胞等）需使用孔板離心，確保理想效果
8． 如果懸浮細(xì)胞不采取離心，建議懸浮細(xì)胞檢測(cè)中的實(shí)驗(yàn)步驟8延長(zhǎng)孵育時(shí)間到2小時(shí)或更長(zhǎng)
9． 如果酶標(biāo)儀測(cè)讀的讀數(shù)過(guò)低，可以繼續(xù)延長(zhǎng)的孵育時(shí)間到24小時(shí)
10．如果沒(méi)有570nm的酶標(biāo)儀，可以使用550至600nm波長(zhǎng)范圍的濾波器替代
11．可以使用其它培養(yǎng)板檢測(cè)，相應(yīng)調(diào)整的用量，培養(yǎng)液和染色液的用量之比為10：1
12．本公司提供系列細(xì)胞繁殖和毒性檢測(cè)試劑盒
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能長(zhǎng)期穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰
溶解液(Reagent B)
染色液(Reagent A)
染色液(Reagent A)
溶解液(Reagent B)
溶解液(Reagent B)
染色液(Reagent A)