DNA聚合酶要進(jìn)行DNA聚合反應(yīng)時(shí)一定要有引子 (primer),因?yàn)樗荒芤砸铀峁┑?’-OH為起始點(diǎn)進(jìn)行延伸 (extension) 的工作,而不能就地重新合成新的DNA (de novo synthesis)。 一般實(shí)驗(yàn)常以人工合成的寡核苷酸為引子進(jìn)行DNA聚合反應(yīng),這時(shí)固然可以根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)核酸引子,但也可以采用逢機(jī)引子(random primers)。 所謂逢機(jī)引子即其序列為逢機(jī)序列,不經(jīng)特別設(shè)計(jì),目前應(yīng)用zui廣者是以自動(dòng)化機(jī)器所合成的、六到八個(gè)核苷酸長(zhǎng)的寡核苷酸混合物;反應(yīng)進(jìn)行中若有任何一條逢機(jī)引子結(jié)合到模版DNA,即可引導(dǎo)DNA聚合反應(yīng)的進(jìn)行。 以random priming方法進(jìn)行核酸標(biāo)定,是以逢機(jī)引子引導(dǎo)Klenow fragment(large fragment of E. coli DNA polymerase I) 進(jìn)行DNA聚合反應(yīng),并在反應(yīng)過(guò)程中添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP等標(biāo)定物質(zhì)。 而為了避免random priming也發(fā)生于載體部份的DNA,不要直接以質(zhì)體DNA為模版進(jìn)行標(biāo)定反應(yīng),而應(yīng)預(yù)先將目標(biāo)DNA自載體切除出來(lái)。
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