走近臺盼藍基本信息
中英文名稱:臺盼藍(Trypan Blue)或稱臺盼蘭、錐蟲藍、曲利苯藍
分子式:C34H24N6O14S4Na4
分子量: 960.82
可溶于水(10mg/ml)
臺盼藍是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性。還常用于檢測細胞是否存活。活細胞不會被染成藍色,而死細胞會被染成淡藍色。
臺盼藍可被巨噬細胞吞噬,故可用于巨噬細胞的活體染色劑。
走近臺盼藍染色液機理
正常的活細胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍,使之不能夠進入胞內(nèi);而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經(jīng)死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中zui常用的死細胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。
臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細胞存活率進行比較的定量。
臺盼藍染色只需3-5分鐘即可完成,并且操作非常簡單。
臺盼藍染色液操作步驟
步驟:(來自supergama)
1、4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。(也可買Gibco的成品);
2、胰酶消化貼壁細胞,制備單細胞懸液,并作適當稀釋。
3、染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。(終濃度0.04%)
4、計數(shù):在三分鐘內(nèi),分別計數(shù)活細胞和死細胞。 1 e7 e* I* S) ^% X8 U$ K- _
5、鏡下觀察,死細胞被染成明顯的藍色,而活細胞拒染呈無色透明狀。
6、統(tǒng)計細胞活力:活細胞率(%)= 活細胞總數(shù)/(活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù))×100%
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