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非限制性體干細胞的分離
非限制性體干細胞（USSCs）的分離
試劑和材料：
1. 起始培養(yǎng)基；
2. 擴增培養(yǎng)基；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. PBSA；
5. T25培養(yǎng)瓶；
1. 起始培養(yǎng)基；
2. 擴增培養(yǎng)基；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. PBSA；
5. T25培養(yǎng)瓶；
實驗方法：
1. 制備和分離臍帶血來源的MNCs（CB-MNCs）；
2. 如果使用凍存的CB-MNCs，復蘇的細胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個細胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；
4. 將細胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細胞因子；
5. 形成USSC集落后，在擴增培養(yǎng)基中擴增細胞；
6. 將細胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)；
7. 到達80%匯合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細胞，并按1：3比例傳代，在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)；
1. 制備和分離臍帶血來源的MNCs（CB-MNCs）；
2. 如果使用凍存的CB-MNCs，復蘇的細胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個細胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；
4. 將細胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細胞因子；
5. 形成USSC集落后，在擴增培養(yǎng)基中擴增細胞；
6. 將細胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)；
7. 到達80%匯合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細胞，并按1：3比例傳代，在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)；
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