人富含 NK 活性大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)的純化試劑盒實驗方法

【產(chǎn)品規(guī)格】

 100ml/Kit

 【產(chǎn)品組成】

 為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

【實驗前準(zhǔn)備】 

適用儀器：zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

1. 收集從外周血中分離的單個核細(xì)胞（人全血單個核細(xì)胞分離液，產(chǎn)品貨號；LDS1075）： 1×10⁸ 個懸于 1ml 無血清培養(yǎng)基中。

2. 梯度分離溶液制備，使用使用梯度制備稀釋液參考下表將原液稀釋至所需濃度：

3. 梯度分離層的制備：將梯度分離液由高密度至低密度逐層加入至 10ml 離心管（試管）內(nèi)，每層約 1.2-1.5ml 加入后應(yīng)可見明顯的梯度界面，同時標(biāo)記 70%層上部界面及 73% 底部界面位置。

 4. 上樣：將單個核細(xì)胞單細(xì)胞懸液 1ml 加至梯度界面上。

 5. 離心：400g，離心 20-25min。

 6. 取樣：吸取 73%與 70%溶液界面及上下兩層分離溶液（即步驟 3 標(biāo)記位置之間的溶液），

細(xì)胞經(jīng)洗滌后供后續(xù)試驗。

注：樣本量加大時請客戶按選取對應(yīng)耗材且按比例增加試劑用量，但應(yīng)注意加入試劑及樣本

后總體積不超過離心管總體積的 2/3。

【注意事項】

1. 實驗全過程需在 20℃±2℃下進行，否則影響離心效果。

2. 由于多層分離溶液之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。

3. 試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。

【儲存條件及有效期】常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。