手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
DNA探針一般可以用32P, 35S或非放射性物質(zhì)如biotin及digoxigenin （DIG） 加以標(biāo)定；標(biāo)定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應(yīng)中，另加入 [α-32P] dATP,[α-32P] dCTP或DIG-11-dUTP等標(biāo)定物質(zhì)，所合成出來的即是被標(biāo)定的核酸片段。目前常見的方法包括nick translation, random priming與polymerase chain reaction（PCR） 等。 若須對DNA進(jìn)行end labeling時，可以進(jìn)行kinase或filling-in reaction。
前者以 [γ-32P] ATP為phosphate donor，利用T4 polynucleotide kinase的活性對帶有5’-OH的DNA進(jìn)行標(biāo)定。人工合成的寡核苷酸 （oligonucleotides） 5’端為-OH group，可直接用于kinase reaction；一般DNA片段，若5’端帶有phosphate group，先經(jīng)phosphatase處理，再進(jìn)行kinase reaction。 Filling-in reaction是將DNA以特定限制酶切開，露出recessed 3’ termini后，利用Klenow的活性把3’端補(bǔ)齊 （filling-in）；因此，只要加入適當(dāng)?shù)?[α-32P] dNTP，即可在DNA的3’端進(jìn)行標(biāo)定。
此外，也可以應(yīng)用bacteriophage T4 DNA polymerase 的3’→5’ exonuclease 活性制造recessed 3’termini，再進(jìn)行filling-in。 至于正意股或反意股RNA探針，則可以 [α-32P] UTP或DIG-11-UTP等為標(biāo)定物質(zhì)，應(yīng)用胞外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)加以標(biāo)定。 下面要介紹的是目前zui常用的方法：random priming及PCR。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心