1.迅速滅活內(nèi)源的RNA酶，以防止RNA降解。

以下3個(gè)方法均可有效使內(nèi)源RNA酶失活：

1）用含離液（如胍鹽）的細(xì)胞裂解液收獲樣品，并立即勻漿。

2）用液氮瞬間凍結(jié)樣品。值得特別注意的是：組織塊足夠小，在浸入液氮的瞬間就能凍結(jié)，以瞬間令RNA酶失活。

3）立即將樣品置于RNAfixer無(wú)液氮RNA樣品儲(chǔ)存液中。它是一種水相、無(wú)毒的收集試劑，能立即穩(wěn)定并保護(hù)完整、未凍結(jié)的組織和細(xì)胞樣品中的RNA。關(guān)鍵要點(diǎn)是組織樣品切片要夠?。?/span><0.5cm），這樣RNAfixer才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。

2. 低濃度RNA的沉淀

純化得到的RNA可能需要通過(guò)沉淀來(lái)濃縮，以滿足一些下游應(yīng)用的需要。醋酸銨(NH4OAc) 沉淀（加0.1體積的5M醋酸銨、2-2.5體積的無(wú)水乙醇，-20°C放置25分鐘以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低濃度的RNA（ng/ml），可以采用共沉淀（如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA ）的方法。核酸助沉劑是linear acrylamide，當(dāng)RNA用于RT-PCR分析時(shí)，線性的丙烯酰胺和DNase處理的糖原都可以作為理想的共沉淀劑，因?yàn)樗鼈兌疾缓?/span>DNA污染，糖原含量高會(huì)抑制PCR反應(yīng)。酵母RNA和未處理的糖原會(huì)給樣品帶來(lái)核酸污染，有可能影響RT-PCR的結(jié)果。沉淀后，注意避免RNA沉淀過(guò)分干燥，因?yàn)檫@可能導(dǎo)致很難重新溶解。

3.破壁方法

細(xì)胞或組織的勻漿對(duì)RNA提取來(lái)說(shuō)，是一個(gè)很關(guān)鍵的步驟，它能夠防止RNA的損失和降解。勻漿的方法應(yīng)根據(jù)細(xì)胞或組織的類型來(lái)選擇。大部分培養(yǎng)的細(xì)胞可以置于細(xì)胞裂解液中，通過(guò)簡(jiǎn)單的渦旋震蕩來(lái)勻漿；而動(dòng)物組織、植物組織、酵母和細(xì)菌、真菌則常常需要更加劇烈的方法，通常用液氮研磨。比如說(shuō)細(xì)菌（特別是革蘭氏陽(yáng)性菌）的細(xì)胞壁，就需要溶菌酶消化來(lái)實(shí)現(xiàn)的細(xì)胞裂解和RNA的大回收。酵母和革蘭氏陽(yáng)性菌通常還需要液氮研磨過(guò)程中加入玻璃微珠幫助破壁，酵母提取也可以加入諸如Lyticase等破壁酶幫助破壁，再用TRIpure或RNApure進(jìn)行提取。