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微生物菌種如何分離純化?

來源:上海一研生物科技有限公司   2017年08月15日 13:32  

【方法】從成都熱電廠采集土樣中分離得到一株微生物菌種, 分析該菌株的形態(tài)學特征、培養(yǎng)特征及 16S rDNA 序列, 確定菌株的分類地位。利用 Design-Expert 軟件中的 Box-Behnken 法設(shè)計實驗, 通過響應(yīng)面分析對初始 pH 值、溫度、接種量和裝液量 4 個因素進行優(yōu)化, 確定其zui適培養(yǎng)條件。

【結(jié)果】獲得菌株 Z1, 該菌為革蘭氏陰性菌, 短桿狀, 經(jīng) 16S rDNA 鑒定為嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans, 簡稱 At. f)。確定菌株zui適培養(yǎng)條件為: pH 1.8、溫度 30 °C、接種量 14%、裝液量 250 mL 搖瓶裝 60 mL 培養(yǎng)液。在此條件下, Z1 的亞鐵氧化率可達 99.7%。

【結(jié)論】Z1 菌株適合于生物浸礦的應(yīng)用。

1947 年, Colmer 和 Hinkle 從礦山酸性廢水中分離出一株嗜酸桿菌命名為氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans, 簡稱 T. f), 并證明該菌能促進煤中黃天礦的氧化和溶解, 這被認為是微生物冶金研究的開端。T. f 屬于革蘭氏陰性菌, 具有專性好氧、嗜酸、化能自養(yǎng)等特點, 該菌通過氧化亞鐵離子為三價鐵離子或氧化還原態(tài)硫化物為硫酸根而獲得生長和生命活動的能量, 在生物脫硫、生物冶金、生物處理污泥中的重金屬和有色金屬回收等領(lǐng)域都具有一定的應(yīng)用價值。隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展, 微生物的鑒定手段被大大豐富, 尤其是分子生物學技術(shù)的發(fā)展, 使微生物的分類和鑒定結(jié)果更為快捷、準確。 Peng H. 從不同的礦井水中分離出 4 株不同的氧化亞鐵硫桿菌, 應(yīng)用 16S rDNA 序列分析法進行了分類和鑒定。李廣悅、梅健、蔡培和李茹等用單因素或正交實驗對氧化亞鐵硫桿菌的培養(yǎng)條件進行了研究。

響應(yīng)面分析法是分析響應(yīng)變量 η 與一組輸入變量(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)之間的函數(shù)關(guān)系[η=f(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)], 也是一種實驗條件尋優(yōu)的方法, 微生物菌種適合于解決非線性數(shù)據(jù)處理的相關(guān)問題。與以往的單因素或正交實驗相比, 其優(yōu)點在于不僅能確定單因素對菌株活性的影響, 而且能分析各個因素間交互作用的大小, 同時通過回歸模型可以分析出影響菌株活性的主要因素。本文以從四川成都熱電廠附近土樣中分離得到的一株嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌為研究對象, 對該菌株進行了形態(tài)、培養(yǎng)特性及 16S rDNA 序列分析。
規(guī)格:        ≥98%            Nobiletin    *:    川陳皮素    
規(guī)格:        ≥98%            Ligustrazine    *:    川芎嗪    
規(guī)格:        ≥98%             Andrographolide    *:    穿心蓮內(nèi)酯,穿心蓮乙素            
規(guī)格:        98%    Andrographolide    *:    穿心蓮乙素    
規(guī)格:        ≥98%    Stemonidine    *:    次百部堿        
規(guī)格:        95%    Eleutheroside B    *:    刺五加苷B  
微生物菌種  

 

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