ATCC菌種從細(xì)菌中提取一種可分泌至培養(yǎng)基上清的一種小分子多肽，按照文獻(xiàn)的方法是取細(xì)菌上清后用抽提，可反復(fù)做過多次，蛋白總是沒有活性，不知道各位同仁有沒有什么好方法？請指教！
以下參考意見：
參考一：
是有機(jī)溶劑，所以但沒有活性。分離這種分泌性蛋白質(zhì)，可以先將上清液透析，然后過柱。 

參考二：
蛋白要保持活性，必須維持三維構(gòu)象，而在有機(jī)溶劑處理的情況下，蛋白的三維構(gòu)象被破壞，自然就沒有活性了。
如果你的培養(yǎng)液是高鹽濃度的，你可以在得到上清的可溶性蛋白后，加入5－10倍體積的復(fù)性液，以稀釋鹽濃度，防止在下一步透析過程中隨著鹽濃度的降低，造成蛋白析出沉淀而喪失活性，然后用透析袋進(jìn)行透析，4度以防止蛋白降解，4-6小時，然后冷凍干燥，這樣得到的蛋白就能保持活性了。 

參考三：
你的蛋白鏈內(nèi)有二硫鍵么？結(jié)構(gòu)一般不會太復(fù)雜吧？除非有復(fù)雜的二硫鍵，這么小的蛋白，復(fù)性應(yīng)該不是主要矛盾。
一些小蛋白如果在有機(jī)溶劑中發(fā)生的疏水結(jié)構(gòu)的改變是可逆的，而且疏水性較強(qiáng)，那可能就可以抽提，很容易和大部分蛋白分開，不過脂類和脂蛋白肯定去不掉。
但是能溶于蛋白我懷疑很有可能一般的水相條件并不是很好溶，先確定一下這個問題，然后結(jié)合你的測活方法，看看是不是在測活的時候蛋白失活的。 

參考四：
我的蛋白確實(shí)是在一般的水相條件不好溶，活性的檢測方法沒什么問題，
抽提后用6M的尿素溶解，加ddH2O 倍比稀釋后檢測活性! 這是文獻(xiàn)上的方法，可總是沒有活性。 不知道是不抽提的方法有問題？抽提法有沒有什么要注意的地方？ 

參考五：
培養(yǎng)上清中沒有尿素，可能蛋白濃度不高，但還是要確定一下蛋白能溶么？
或是直接純化前取上清測活看看，到底是不是問題。 

參考六：
我所提的蛋白是不溶于水的，但是在6M、8M的尿素中是可容的
取上清做證實(shí)上清是有活性的，所以我覺得是尿素沒有將我所需求的蛋白抽提出來，不知道是不是細(xì)節(jié)上出了些問題？各位，有沒有更好的辦法呢？ 

參考七：
ATCC菌種沒有把我所需的蛋白抽提出來 
假單胞分離瓊脂    25克    RT，避光    *
鉀測試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)）    100支/盒    RT    *
鉀    25克    RT    *
甲狀旁腺激素PTH1-84    1公斤        *
甲酰胺    350ku    2～8℃    *
甲酸鈉    1克    保存：-20℃    *
甲酸鉀    1克        *
甲酸銨    100毫克    保存：-20℃    *
甲殼胺    500克        *
甲基紫6B    50毫克        進(jìn)口/國產(chǎn)
甲基紫    10毫克        *
甲基纖維素    10克        *
甲基叔丁基醚    500克        *
甲基綠    1公斤        *
甲基藍(lán)    25KU        *
甲基磺酸乙酯    5克    RT    *
甲基磺酸甲酯    25克        進(jìn)口/國產(chǎn)
甲基磺酸    1克    2～8℃    *
ATCC菌種