青海發(fā)光桿菌溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測(cè)定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類(lèi)胡蘿卜素的含量，只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類(lèi)胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a、b時(shí)為了排除類(lèi)胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的zui大吸收峰。

二、材料、儀器設(shè)備及試劑

（一）材料：新鮮（或烘干）的植物葉片。

（二）儀器設(shè)備：1. 分光光度計(jì)；2. 電子頂載天平（感量0.01g）；3. 研缽；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量濾紙；7. 吸水紙；8. 擦境紙；9. 滴管。

（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或干材料，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），混勻。2. 稱(chēng)取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min。3. 取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤(rùn)，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過(guò)濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，zui后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?. 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。zui后用乙醇定容至25ml，搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白，在波長(zhǎng)665nm、649nm下測(cè)定吸光度。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算：將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.9665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總?cè)~綠素的濃度。zui后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：

     青海發(fā)光桿菌的含量（mg/g）= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）。
5-巰基-1-甲基四氮唑 98％    13183-79-4    CAS號(hào)：    5-Mercapto-1-methyltetrazole    英文名稱(chēng)：
5-噻唑甲醛    1003-32-3    CAS號(hào)：    Thiazole-5-carboxaldehyde    英文名稱(chēng)：
5-叔丁基-1,3-苯二羧酸    2359/9/3    CAS號(hào)：    5-TERT-BUTYLISOPHTHALIC ACID    英文名稱(chēng)：
5-叔丁基-2-羥基苯甲醛    2725-53-3    CAS號(hào)：    5-TERT-BUTYL-2-HYDROXY-BENZALDEHYDE    英文名稱(chēng)：
5-硝基尿嘧啶;5-硝基;5-硝基-2,6-二羥基嘧啶;2,4-二羥基-5-硝基嘧啶    611-08-5    CAS號(hào)：    5-Nitrouracil;2,4-Dihydroxy-5-nitropyriMidine    英文名稱(chēng)：
青海發(fā)光桿菌