色譜柱的平衡及組成
色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70 kg/cm2 時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。
色譜柱是由柱管和固定相組成,按照拄管的粗細(xì)和固定相的填充方式分為(1)填充柱;(2)毛細(xì)管柱。
色譜柱的平衡
反向色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。請一定確保您所使用的活動(dòng)相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色譜柱在運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉,因此在用活動(dòng)相分析樣品之前,應(yīng)使用分10-20倍的體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱。
假如您所使用的活動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)留意用含水量很高(約95%)的活動(dòng)相過渡,樣品分析完后,沖洗柱子是亦然。過往傳統(tǒng)的方法使用純水沖洗,對于非極性柱,如C8或C18,由于純水不能浸潤填料表面而沖倒碳鏈,造成柱效下降。
另外,分析樣品時(shí),由于純水在填料表面不能浸潤形成水膜,出現(xiàn)樣品不保存而分不開,重現(xiàn)性差,所以對于一般的C18或C8,有機(jī)溶劑不能低于5%。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。假如該色譜柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活動(dòng)相,請?jiān)谑褂没顒?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡。
色譜柱在平衡過程中,將流速緩慢地進(jìn)步用活動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑濃度假如較低,則需要較長的時(shí)間平衡)。
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